一種結合光子晶體的分支滾環擴增檢測miRNA的方法
本發明公開了一種結合光子晶體的分支滾環擴增檢測miRNA的方法。該方法由四個部分組成:a.制備點狀光子晶體;b.5’端磷酸化的鎖式探針的兩末端與靶標miRNA互補配對后利用T4RNA ligase 2連接成環;c.以成環的鎖式探針作為模板,靶標miRNA作為引物,在phi29DNA聚合酶的作用下發生線性滾環擴增,通過加入二級引物,使線性滾環擴增沿著支鏈方向擴增,達到信號進一步放大;d.往滾環擴增產物中加入SYBR GREENⅠ染料后加到點狀光子晶體上進行檢測。本發明通過利用光子晶體效應對發光的調控,增強熒光強度,從而增強檢測的靈敏度,降低檢測下限,在最優實驗條件下,該方法的線性范圍為0.1aM?1pM,miRNA的檢測限低至1aM。本發明無需對循環miRNA進行分離提取,可直接用于實際樣本中循環miRNA的檢測。
武漢大學
2021-02-01