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一種結(jié)合光子晶體的分支滾環(huán)擴(kuò)增檢測miRNA的方法

2021-02-01 09:14:59
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關(guān)鍵詞: 光子晶體
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項目成果/簡介:

本發(fā)明公開了一種結(jié)合光子晶體的分支滾環(huán)擴(kuò)增檢測miRNA的方法。該方法由四個部分組成:a.制備點狀光子晶體;b.5’端磷酸化的鎖式探針的兩末端與靶標(biāo)miRNA互補(bǔ)配對后利用T4RNA ligase 2連接成環(huán);c.以成環(huán)的鎖式探針作為模板,靶標(biāo)miRNA作為引物,在phi29DNA聚合酶的作用下發(fā)生線性滾環(huán)擴(kuò)增,通過加入二級引物,使線性滾環(huán)擴(kuò)增沿著支鏈方向擴(kuò)增,達(dá)到信號進(jìn)一步放大;d.往滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物中加入SYBR GREENⅠ染料后加到點狀光子晶體上進(jìn)行檢測。本發(fā)明通過利用光子晶體效應(yīng)對發(fā)光的調(diào)控,增強(qiáng)熒光強(qiáng)度,從而增強(qiáng)檢測的靈敏度,降低檢測下限,在最優(yōu)實驗條件下,該方法的線性范圍為0.1aM?1pM,miRNA的檢測限低至1aM。本發(fā)明無需對循環(huán)miRNA進(jìn)行分離提取,可直接用于實際樣本中循環(huán)miRNA的檢測。

項目階段:

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