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評估基因編輯工具酶的新方法以及高保真的新基因編輯酶
CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins)是目前最常用的基因編輯工具酶，在科研領域被廣泛應用，而在臨床方面的應用因為其脫靶活性一度停滯不前。它通過guide RNA（gRNA）與靶向DNA序列的配對，從而將Cas9錨定在靶向基因并誘導產生DNA雙鏈斷裂（DSB）。在基因編輯誘發(fā)的DSB的修復過程中，一定幾率會產生基因突變或者外源DNA片段的插入，從而達到基因編輯的目的。在實際應用過程中，一個好的基因編輯酶Cas9需要同時滿足高效切割靶位點、低脫靶活性和低染色體異常三個特點。目前在這三個方面，有一部分基于PCR的方法用于估算基因編輯效率，但其結果可靠性有待提高；有一些基于高通量測序的方法可以在體內或者體外檢測基因編輯酶的脫靶活性；尚無系統(tǒng)的可定量的測量基因組異常結構的方法。本項目開發(fā)了一種新的方法，可以用來同時定量檢測Cas9編輯效率和脫靶活性以及編輯引起的染色體異常結構，即primer-extension-mediated sequencing（PEM-seq）。這是對基因編輯和DNA損傷修復等領域都有巨大促進作用的新技術。與此同時，該項目包括了該團隊利用PEM-seq篩選出的一個相比于現(xiàn)有Cas9變體具有更低脫靶活性且與野生型Cas9切割效率相當?shù)腃as9變體further enhanced Cas9 (FeCas9)。
北京大學
2021-02-01
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鴨坦布蘇病毒E蛋白和LTB的融合蛋白及其應用
本發(fā)明的目的是提供一種鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗，即篩選獲得鴨坦布蘇病毒E蛋白具有優(yōu)勢抗原表位的DomainIII結構域，并通過Lingker與腸毒素LTB組成新型融合蛋白LTB-Es，并以該融合蛋白作為抗原來制備鴨坦布蘇病毒基因工程亞單位疫苗。本發(fā)明中鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白LTB-Es，其編碼蛋白的氨基酸序列為SEQIDNO:1；其中一種核苷酸序列為SEQIDNO:2。本發(fā)明利用原核表達載體構建了能表達鴨坦布蘇病毒新型融合蛋白LTB-Es的大腸桿菌BL21(DE3)宿主菌。將重組表達的蛋白純化后制備成基因工程亞單位疫苗，可使免疫后鴨群獲得免疫保護。
青島農業(yè)大學
2021-04-11
以靶標蛋白甾醇14α-脫甲基酶三維結構篩選的小分子化合物及其在制備殺菌劑中的應用
本發(fā)明公開了以靶標蛋白甾醇14α?脫甲基酶三維結構篩選的小分子化合物及其在制備殺菌劑中的應用，所述小分子化合物為((1R,5S)?3?((3?苯基?1,2,4?噁二唑?5?基)甲基)?3,4,5,6?四氫?1H?1,5?甲撐吡啶并[1,2?a][1,5]二氮環(huán)辛?8(2H)?酮鹽酸鹽。本發(fā)明通過室內藥劑敏感性測定，證明了所述小分子化合物對引起小麥赤霉病害的主要植物病原真菌禾谷鐮刀菌具有良好的抑制活
青島農業(yè)大學
2021-01-12
蛋白-蛋白及?RNA-蛋白質相互作用成像新技術
已有樣品/n本發(fā)明涉及蛋白-蛋白及RNA-蛋白質相互作用成像領域，基于激發(fā)波長在600nm以上的紅色熒光蛋白mNeptune熒光片段互補技術，建立了位于活體成像“光學窗口”的雙分子和三分子熒光互補系統(tǒng)。其中雙分子熒光互補系統(tǒng)可以用于活細胞及活體內蛋白-蛋白相互作用成像，三分子熒光互補系統(tǒng)可以用于活細胞及活體內RNA-蛋白質之間的相互作用成像。該成果為首次建立活體內RNA-蛋白質相互作用熒光成像技術，該技術也將有助于開發(fā)活細胞及活體內藥物評價體系和藥物篩選平臺。
中國科學院大學
2021-01-12
乙胺丁醇靶標蛋白，分枝桿菌細胞壁阿拉伯糖基轉移酶結構
南開大學藥物化學生物學國家重點實驗室、生命科學學院、藥學院教授饒子和院士，南開大學生命科學學院2014屆博士畢業(yè)生、上海科技大學王權教授，英國伯明翰大學Gurdyal Besra教授，上海科技大學李俊副研究員為論文共同通訊作者。南開大學生命科學學院2019屆博士畢業(yè)生張璐（排名第一）、上海科技大學博士生趙耀為論文共同第一作者，南開大學藥學院趙煒教授是該成果合作者之一，南開大學生命科學學院2016級本科生吳方羽參與文章發(fā)表。南開大學細胞應答交叉科學中心為論文通訊單位之一。據(jù)介紹，該聯(lián)合研究團隊綜合利用冷凍電子顯微鏡技術和X射線晶體學技術解析了抗結核一線藥物乙胺丁醇與靶標蛋白，分枝桿菌膜蛋白糖基轉移酶EmbA-EmbB-AcpM2蛋白復合物，及與EmbC2-AcpM2蛋白復合物與乙胺丁醇結合的高分辨率三維結構，首次闡明這個使用了近60年，治愈了無數(shù)結核病感染者的一線藥物的抑制作用機理，并首次揭示了臨床耐藥的分子機制。研究結果顯示，每個Emb蛋白單體均為含有氨基端15次跨膜螺旋的跨膜區(qū)和羧基端可溶區(qū)結構域的折疊形式，并且以EmbA-EmbB或EmbC-EmbC組成異源或同源二聚體，并首次報道了每個Emb蛋白均在胞內結合一個酰基載脂蛋白AcpM，最終組成EmbA-EmbB-AcpM2/EmbC2-AcpM2蛋白復合物。據(jù)悉，這是世界上第一個解析的源于結核分枝桿菌的膜蛋白三維結構，該研究共解析并向蛋白質數(shù)據(jù)庫（protein data bank, PDB）投遞5個蛋白質結構坐標，為全世界范圍研發(fā)設計新型抗結核抑制劑提供可靠的數(shù)據(jù)支撐。饒子和院士團隊長期致力于抗結核藥物重要靶標蛋白質的結構和功能研究以及抗結核新藥研發(fā)，此項最新研究成果是繼2018年饒子和院士南開團隊在《科學》雜志發(fā)表分枝桿菌呼吸鏈超級復合物高分辨率結構，2019年上海科技大學團隊在《細胞》雜志發(fā)表分枝桿菌關鍵藥靶跨膜轉運蛋白MmpL3與抑制劑復合物結構后，在抗結核藥物研發(fā)領域的又一重大科研成果。
南開大學
2021-04-11
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一種快速測定乳酸菌脅迫菌株存活率的方法
項目成果/簡介:本發(fā)明提供了一種全新的通過液體培養(yǎng)測定乳酸菌脅迫菌株存活率的方法,屬于乳酸菌脅迫菌株存活率測定方法的技術領域,主要包括步驟。
安徽農業(yè)大學
2021-04-10
一種快速測定乳酸菌脅迫菌株存活率的方法
本發(fā)明提供了一種全新的通過液體培養(yǎng)測定乳酸菌脅迫菌株存活率的方法,屬于乳酸菌脅迫菌株存活率測定方法的技術領域,主要包括步驟
安徽農業(yè)大學
2021-04-29
一種冠突散囊菌株及其應用
本發(fā)明公開了一種冠突散囊菌株及其應用，冠突散囊菌株(Eurotium cristatum)于2016年的10月13日保藏于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.13173；冠突散囊菌株是從茯磚茶中分離出的；冠突散囊菌株用于制備冠突散囊菌株微生物制劑。本發(fā)明的冠突散囊菌株微生物制劑具有抗氧化作用(具有清除DPPH自由基的作用、清楚超氧陰離子作用、具有還原作用)，抑菌作用(抑制大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、腸沙門氏菌)，以及抑制乙酰膽堿酯酶活性作用。
青島農業(yè)大學
2021-04-13
一株棘孢木霉菌株及其應用
本發(fā)明公開了一株棘孢木霉菌株及其應用，該棘孢木霉菌株命名為棘孢木霉(Trichoderma?asperellum)Thz01，保藏號為CGMCC?No.6422。本發(fā)明的棘孢木霉菌株是從辣椒生境中分離出來的，對辣椒疫霉菌具有顯著的拮抗作用，明顯重寄生于辣椒疫霉菌，能有效降解辣椒疫霉菌的菌絲體；用該菌株制備得到的生防制劑，可有效防治辣椒疫病。
浙江大學
2021-04-13
α－環(huán)糊精葡萄糖基轉移酶的制備及酶法生產α－環(huán)糊精
環(huán)糊精在食品、香料、醫(yī)藥、農藥、化工等行業(yè)有著廣泛的應用。本項目通過基因工程技術構建了高效表達?-CGT 酶工程菌，通過發(fā)酵優(yōu)化，發(fā)酵液酶活達到 100 U/ml (以?-環(huán)糊精的生成速率計)以上，70400 U/ml (以水解活性計)，具有發(fā)酵周期短，工藝簡單易控等特點。發(fā)酵結束后發(fā)酵液過濾除菌可以直接作 為酶液進行轉化反應。此外，通過蛋白質工程技術改造了酶的產物特異性，當以15%淀粉為底物時，環(huán)糊精總轉化率達到 55%以上，其中α-環(huán)糊精含量達到 85％以上
江南大學
2021-04-11