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本發(fā)明公開(kāi)了一對(duì)轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶及其編碼基因與應(yīng)用。這對(duì)轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶(TALEN)由一對(duì)DNA識(shí)別蛋白分別與Fok1？DNA內(nèi)切酶的兩個(gè)異源亞基融合得到，可以特異性地識(shí)別山羊或綿羊朊蛋白基因(PRNP)exon2上的兩個(gè)相鄰位點(diǎn)。將這對(duì)轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶同時(shí)轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞時(shí)，其能對(duì)宿主細(xì)胞PRNP基因的exon2位點(diǎn)打靶，并使打靶位點(diǎn)發(fā)生基因突變，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)山羊或綿羊PRNP基因的靶向修飾，具有特異性強(qiáng)、打靶效率高、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明涉及一組用于同時(shí)檢測(cè)腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌的三種病原的核酸、試劑盒和檢測(cè)方法，其中，用于多重PCR同時(shí)檢測(cè)三種病原的核酸包括腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌的上、下游引物；用于熒光定量PCR同時(shí)檢測(cè)三種病原的核酸還包括有各病原對(duì)應(yīng)的探針。本發(fā)明還建立了一種比較高效、靈敏的，可同時(shí)檢測(cè)腐爛病菌、黃化病植原體和叢簇病菌這三種病原的檢測(cè)方法。該方法能有效提高檢測(cè)的靈敏度，避免假陰性結(jié)果的

常溫保存性能穩(wěn)定 防止理化特性的改變，凍干試劑水份含量非常低，使其穩(wěn)定性提高，避免酶等粘稠度高的組分損耗。 快速活化 遇水即化并恢復(fù)原有試劑的理化特性和活性。 無(wú)需冷鏈運(yùn)輸 常溫下可運(yùn)輸，解決了冷鏈運(yùn)輸中因溫度失控導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量下降的不足，降低了運(yùn)輸過(guò)程中的風(fēng)險(xiǎn)和損耗。 操作更簡(jiǎn)單，零損耗 凍干試劑預(yù)分裝到八聯(lián)管，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差。縮短了整個(gè)PCR檢測(cè)過(guò)程的時(shí)長(zhǎng)，極大地提高臨床檢驗(yàn)效率。 高便捷性 八聯(lián)管一物兩用（既作為凍干試劑裝載容器，又作為PCR實(shí)驗(yàn)反應(yīng)容器），無(wú)需體系配制，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作。 固態(tài)試劑真空包裝 試劑成分緊貼八聯(lián)管底部，避免了運(yùn)輸過(guò)程中由于顆粒的不固定性而導(dǎo)致顆粒破損變成粉末造成一定的損耗，增加產(chǎn)品實(shí)用性。

1.痛點(diǎn)問(wèn)題 盡管目前已有一系列臨床治療手段，但癌癥仍然是人類(lèi)健康與生命安全的最主要威脅之一，大多數(shù)癌癥仍然有巨大的未滿(mǎn)足醫(yī)療需求。抗腫瘤藥物的研發(fā)依賴(lài)于靶點(diǎn)分子的鑒定。因此，依托于新的抑癌靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)全新的抗腫瘤靶向藥，是當(dāng)前創(chuàng)新藥研發(fā)的前沿。現(xiàn)有藥物靶點(diǎn)主要是蛋白編碼基因，所開(kāi)發(fā)藥物以靶向蛋白質(zhì)的抗體藥、小分子化合物藥為主。 長(zhǎng)非編碼RNA（lncRNA）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)不編碼蛋白質(zhì)的RNA分子，具有組織特異性強(qiáng)，功能復(fù)雜，種類(lèi)數(shù)量大等特征。研究發(fā)現(xiàn)多個(gè)lncRNA與各種生物學(xué)過(guò)程相關(guān)，但是大多數(shù)lncRNA的生物學(xué)功能仍然未知。學(xué)術(shù)界已發(fā)現(xiàn)多個(gè)與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的lncRNA，但目前尚沒(méi)有靶向lncRNA的抗腫瘤藥物上市或在臨床試驗(yàn)中。鑒于lncRNA復(fù)雜、多樣化、特異性的生物學(xué)功能特征，這一大類(lèi)分子有望成為新的疾病治療靶點(diǎn)庫(kù)。與已知的蛋白靶點(diǎn)相比，lncRNA研究少，易于獲得原創(chuàng)、高價(jià)值的靶點(diǎn)專(zhuān)利。這要求基礎(chǔ)研發(fā)工作在特定生理或疾病狀態(tài)下，從成千上萬(wàn)的lncRNA中準(zhǔn)確鑒定具有核心、基礎(chǔ)生物學(xué)意義的lncRNA，并詳細(xì)解析其細(xì)胞功能與分子機(jī)制，確定其作為疾病治療靶點(diǎn)的可行性與科學(xué)基礎(chǔ)。 2.解決方案 在此前的研究中，本項(xiàng)目組以腫瘤體系為研究對(duì)象，開(kāi)發(fā)了基于信息論的多組學(xué)數(shù)據(jù)挖掘與lncRNA功能預(yù)測(cè)方法流程。在多種癌癥中鑒定了具有核心生物學(xué)功能的lncRNA。例如，首次發(fā)現(xiàn)一個(gè)此前從未被研究過(guò)的lncRNA對(duì)于肝癌腫瘤細(xì)胞等高增殖率細(xì)胞的核仁結(jié)構(gòu)及功能至關(guān)重要。研究證明該lncRNA在腫瘤中特異性地高表達(dá)，并且對(duì)于腫瘤細(xì)胞的快速增殖不可或缺，因此項(xiàng)目提出以該lncRNA作為腫瘤治療靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)抗腫瘤小核酸藥或小分子化學(xué)藥，控制肝癌發(fā)展。 項(xiàng)目技術(shù)核心是在腫瘤體系中鑒定重要lncRNA的技術(shù)流程，預(yù)期產(chǎn)品是針對(duì)一系列l(wèi)ncRNA新靶點(diǎn)的靶向藥物。 3.合作需求 1)資金需求：針對(duì)新靶點(diǎn)lncRNA的小核酸藥臨床前研發(fā)需要的資金投入，在IND申報(bào)前需約2500-5000萬(wàn)元人民幣； 2)孵化資源：公司研發(fā)所需辦公及研發(fā)場(chǎng)地、實(shí)驗(yàn)室、計(jì)算服務(wù)器、分析與測(cè)試公共實(shí)驗(yàn)室等； 3)團(tuán)隊(duì)：生物醫(yī)藥科技公司管理團(tuán)隊(duì)、核酸藥臨床前研發(fā)團(tuán)隊(duì)、商務(wù)開(kāi)發(fā)與合作團(tuán)隊(duì)、財(cái)務(wù)、法務(wù)等支持團(tuán)隊(duì)； 4)CRO公司合作：小核酸序列大規(guī)模合成、敲低效率驗(yàn)證、動(dòng)物模型、藥物毒理、藥代動(dòng)力學(xué)、免疫原性等指標(biāo)測(cè)試； 5)大型醫(yī)藥公司合作：商討未來(lái)技術(shù)轉(zhuǎn)讓方案，利用大型醫(yī)藥公司臨床開(kāi)發(fā)資源，開(kāi)展臨床研發(fā)合作； 6)藥物遞送平臺(tái)合作：針對(duì)小核酸藥靶向遞送需求，開(kāi)展不同遞送工具的合作開(kāi)發(fā)； 7)臨床醫(yī)院合作：針對(duì)臨床治療需求，開(kāi)展小規(guī)模IIT臨床試驗(yàn)，準(zhǔn)備IND申報(bào)； 8)基礎(chǔ)研究合作：與lncRNA研究領(lǐng)域內(nèi)國(guó)內(nèi)外基礎(chǔ)研究團(tuán)隊(duì)合作，開(kāi)發(fā)新的lncRNA靶點(diǎn)。

本發(fā)明公開(kāi)了一種可以同時(shí)檢測(cè)奶牛是否具有脊椎畸形綜合癥(CVM)、白細(xì)胞粘附缺陷癥(BLAD)、尿苷酸合酶缺乏癥(DUMPS)、瓜氨酸血癥(CN)四種遺傳病的引物系統(tǒng)。基于該引物系統(tǒng)所制備的產(chǎn)品，能實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)奶牛CVM、BLAD、DUMPS、CN四種遺傳病基因相關(guān)的4處多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。此外，本發(fā)明還公開(kāi)了能夠同時(shí)聯(lián)合檢測(cè)以上遺傳病和奶牛A2基因型的檢測(cè)方法及其檢測(cè)產(chǎn)品，該聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果可用于指導(dǎo)健康奶牛的篩選、育種等。

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及幾丁質(zhì)特異誘導(dǎo)表達(dá)啟動(dòng)子Ptchi2的序列、順式作用元件的序列“ACTTGTTCA”及其應(yīng)用。從棘孢木霉TD3104(CGMCC No.13161)中克隆得到內(nèi)切幾丁質(zhì)酶基因Tachi2的啟動(dòng)子Ptchi2，其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，該啟動(dòng)子包括啟動(dòng)子核心序列和響應(yīng)幾丁質(zhì)誘導(dǎo)的順式作用元件；具有被幾丁質(zhì)特異誘導(dǎo)、不受葡萄糖抑制的特性。本發(fā)明利用啟動(dòng)子Ptchi2構(gòu)建不同的重組載體或重組菌或表達(dá)盒，分析了Ptchi2的啟動(dòng)子活性，利用缺失突變研究了啟動(dòng)子核心序列和響應(yīng)幾丁質(zhì)誘導(dǎo)的順式作用元件，為其在真菌和植物基因的表達(dá)調(diào)控、植物抗病、蟲(chóng)基因工程中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

本發(fā)明涉及潛在指紋顯現(xiàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種運(yùn)用核酸適配體與溶菌酶識(shí)別，形成G四鏈體扦插熒光分子進(jìn)行熒光檢測(cè)潛指紋的方法。所述包括以下步驟：①按捺指紋：在樣品表面獲得汗?jié)撝讣y；②配制熒光顯色溶液：將DNA溶解于包含NaCl、MgCl2和KCl的Tris?HCl緩沖溶液中，然后加入NMM溶液充分混合；③熒光顯現(xiàn)潛指紋：將步驟②得到的溶液滴涂到步驟①的潛指紋樣品表面反應(yīng)后，用去離子水快速清洗干燥后的

發(fā)現(xiàn)在軸突中特異性抑制FTO或敲低FTO均顯著地降低了GAP-43 mRNA 的局部翻譯。進(jìn)一步的抗m 6 A免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)FTO通過(guò)調(diào)節(jié)GAP-43 mRNA的m 6 A水平從而影響GAP-43的局部翻譯。在過(guò)表達(dá)野生型GAP-43的神經(jīng)元中，抑制FTO可以顯著地降低GAP-43的局部翻譯水平，同時(shí)顯著地抑制了軸突的生長(zhǎng)。而在過(guò)表達(dá)m 6 A 位點(diǎn)突變的GAP-43的神經(jīng)元中，抑制FTO對(duì)GAP-43的蛋白水平及軸突的生長(zhǎng)均沒(méi)有影響。因此，該研究證實(shí)FTO可以通過(guò)調(diào)控軸突中GAP-43 mRNA的m 6 A水平從而影響其局部翻譯，進(jìn)而調(diào)節(jié)軸突的生長(zhǎng)。