結(jié)核分枝桿菌融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3的構(gòu)建.表達和純化方法及其應用
本發(fā)明選擇結(jié)核桿菌生長期和休眠期主要的保護性抗原Mtb10.4和Hsp16.3,構(gòu)建融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3(MH)。在大腸桿菌中表達純化該蛋白,將該蛋白和佐劑混合構(gòu)建亞單位疫苗,分別于BCG初免后12、14周加強免疫C57BL/6小鼠兩次,最后一次免疫6周后檢測細胞免疫反應,最后一次免疫后10周進行結(jié)核菌毒株H37Rv攻擊。結(jié)果:該融合蛋白能在大腸桿菌中穩(wěn)定大量表達,經(jīng)離子交換層析、凝膠過濾層析和疏水層析三步純化得到純度較高的蛋白;構(gòu)建的亞單位疫苗免疫動物可產(chǎn)生針對結(jié)核桿菌特定抗原(Mtb10.4和Hsp16.3)的特異性細胞和體液免疫應答,具有較強的免疫原性;毒株攻擊后,小鼠肺臟結(jié)核菌數(shù)量明顯少于PBS組和BCG組。結(jié)論:本發(fā)明成功構(gòu)建、表達和純化不帶任何標簽的融合蛋白MH,此蛋白可誘導較強的細胞和體液免疫應答并具有一定的動物保護效應,有望成為臨床結(jié)核病預防和治療的候選疫苗。
蘭州大學
2021-01-12