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提出并發(fā)展了一種蛋白質(zhì)“鄰近脫籠”策略，將可遺傳編碼的非天然氨基酸脫籠技術(shù)與計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)篩選技術(shù)相結(jié)合，在一系列不同種類的蛋白質(zhì)上實(shí)現(xiàn)了高時(shí)間分辨的原位激活，為在活細(xì)胞及活體動(dòng)物內(nèi)研究蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)調(diào)控機(jī)制提供了一種普適性技術(shù)。利用這一被命名為 CAGE-prox 的新方法，他們建立并驗(yàn)證了“激酶正交激活和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控”、   “時(shí)間分辨的蛋白質(zhì)組學(xué)分析”，“基于毒素蛋白的抗腫瘤蛋白前藥”等一系列原創(chuàng)應(yīng)用，展示了這一化學(xué)生物學(xué)新技術(shù)在開(kāi)展蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)功能研究與調(diào)控中的優(yōu)勢(shì)和特色。“化學(xué)脫籠”策略，可通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)關(guān)鍵殘基的化學(xué)保護(hù)和脫保護(hù)反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)其活性的“關(guān)－開(kāi)”調(diào)控（Nat. Chem. Biol. 2016, 12, 129）。利用這一技術(shù)，他們先后在賴氨酸（Nat. Chem., 2014, 6, 352; Nat. Chem. Biol., 2014, 10, 1003）、酪氨酸（J. Am. Chem. Soc., 2016, 138, 15118）等天然氨基酸側(cè)鏈上實(shí)現(xiàn)了生物正交斷鍵反應(yīng)和化學(xué)脫籠，開(kāi)展了激酶等蛋白質(zhì)家族的特異激活和機(jī)制研究（ACS Cent. Sci, 2016, 2, 325，ACS Cent. Sci. 2019, 5, 145）。由于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的種類繁多、活性調(diào)控機(jī)制各異，目前該方法仍受可供脫籠的氨基酸種類限制，無(wú)法適用于所有蛋白質(zhì)。

通過(guò)計(jì)算機(jī)虛擬篩選和建立熒光共振能量轉(zhuǎn)移的體外高通量篩選體系，篩選得到新型的ATG4B小分子抑制劑S130。通過(guò)對(duì)自噬信號(hào)通路的研究，發(fā)現(xiàn)S130不影響自噬體功能及其與溶酶體的融合，而是抑制了LC3-PE的去脂化過(guò)程，最終阻斷細(xì)胞自噬。這為進(jìn)一步明確ATG4B在自噬信號(hào)通路中的調(diào)控作用提供了新的理論基礎(chǔ)。通過(guò)抗腫瘤作用的研究，發(fā)現(xiàn)S130可有效抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，且營(yíng)養(yǎng)缺乏能進(jìn)一步增強(qiáng)S130的抗腫瘤效果，而過(guò)表達(dá)ATG4B可部分對(duì)抗S130引起的腫瘤細(xì)胞死亡，提示ATG4B可能是腫瘤治療中的潛在靶點(diǎn)。同時(shí)，藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該抑制劑在體內(nèi)主要分布于腫瘤組織，從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。綜上，該研究表明ATG4B可能是腫瘤治療的潛在藥物靶標(biāo)，而S130作為高效的ATG4B小分子抑制劑具有開(kāi)發(fā)成為腫瘤治療藥物的潛能。

本發(fā)明涉及分子微生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種C型凝集素(C-type?lectin)及其制備和應(yīng)用。C型凝集素為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。制備方法：以許氏平鮋cDNA為模板PCR擴(kuò)增C型凝集素基因，構(gòu)建質(zhì)粒pLecC；將pLecC轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21Transetta(DE3)，對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)后，收集上清，濃縮后即得重組C型凝集素。所述C型凝集素對(duì)多種弧菌具高效凝集作用，經(jīng)C型凝集素處理后的細(xì)菌對(duì)許氏平鮋的侵染能力顯著降低。因此，該C型凝集素有望應(yīng)用于魚(yú)類細(xì)菌性病害的防治。

本項(xiàng)目是采用種子蛋白質(zhì)基因工程手段，將富含賴氨酸的豌豆球蛋白基因（Vicilingene）轉(zhuǎn)入超大穗小麥體內(nèi)并令其表達(dá)，以期大幅度提高超大穗小麥的種子蛋白質(zhì)含量和賴氨酸含量，改良超大穗小麥的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和加工品質(zhì)，使超大穗小麥盡快成為大面積推廣種植的超高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)小麥良種。其次，本項(xiàng)研究將豐富分子遺傳學(xué)理論并開(kāi)辟一條高蛋白品質(zhì)育種的新途徑，所

Mpa六聚體除了與真核生物蛋白酶體調(diào)節(jié)顆粒Rpt1-Rpt6蛋白六聚體以及古細(xì)菌PAN蛋白六聚體具有一定的結(jié)構(gòu)同源性之外，還具有一些明顯不同的結(jié)構(gòu)特征：（1）結(jié)核桿菌Mpa具有形成雙環(huán)的兩個(gè)串聯(lián)寡核苷酸/寡糖結(jié)合（OB）結(jié)構(gòu)域，而古細(xì)菌蛋白酶體相關(guān)ATPase調(diào)控顆粒（PAN）和真核生物蛋白酶體ATPase調(diào)控顆粒復(fù)合體（Rpt1-6）每個(gè)蛋白亞基都只具有單個(gè)OB結(jié)構(gòu)域；（2）Mpa在具有蛋白酶體活化功能的C末端之前具有一個(gè)泛素樣的β-grasp結(jié)構(gòu)域，而古細(xì)菌PAN和真核生物Rpt1-6蛋白復(fù)合體并不具有這樣的一個(gè)β-grasp結(jié)構(gòu)域? 由于β-grasp結(jié)構(gòu)域的存在，Mpa六聚體中各個(gè)蛋白亞基C末端被埋在結(jié)構(gòu)核心中而沒(méi)有暴露在蛋白復(fù)合體結(jié)構(gòu)的表面，這就影響了C末端的GQYL基序與20S 蛋白酶體復(fù)合體的對(duì)接，從而阻礙了六聚化的Mpa與七次對(duì)稱的28聚體的蛋白酶體相互作用。我們通過(guò)功能研究進(jìn)一步解釋了為什么單獨(dú)的Mpa六聚體在體外情況下不能有效結(jié)合蛋白酶體核心顆粒并啟動(dòng)蛋白質(zhì)特異性降解，結(jié)合晶體結(jié)構(gòu)域功能研究，我們提出了結(jié)核桿菌蛋白酶體ATPase調(diào)控顆粒Mpa與20S蛋白酶體復(fù)合體這一分子量超過(guò)1100KDa蛋白質(zhì)機(jī)器的作用模型

1.痛點(diǎn)問(wèn)題 自身免疫系統(tǒng)疾病是困擾人類的一大類疾病，醫(yī)學(xué)界對(duì)其中很多種疾病的具體發(fā)病原因還所知甚少。目前的治療手段和方法也極其有限，幾乎沒(méi)有任何真正的靶向藥物和能夠根治的療法，其治療難度和患者痛苦程度都不亞于癌癥。 IRAK4是固有免疫系統(tǒng)上IL-1家族和TLR家族這兩大信號(hào)通路交匯的最重要的節(jié)點(diǎn)。IRAK4和MyD88通過(guò)形成復(fù)合物來(lái)開(kāi)啟下游各種與免疫反應(yīng)或細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)的基因表達(dá)。IRAK4與其他激酶不同，它既是下游信號(hào)分子的激酶，又同時(shí)起到形成復(fù)合物所必需的支架蛋白的作用。雖然，現(xiàn)有技術(shù)已有眾多IRAK4小分子激酶抑制劑，但它們僅可以抑制激酶本身的活性，顯示出中等的效力，無(wú)法破壞復(fù)合物的形成來(lái)徹底阻斷炎癥反應(yīng)信號(hào)的產(chǎn)生。而PROTAC技術(shù)可通過(guò)降解靶蛋白同時(shí)阻斷IRAK4激酶活性和破壞靶蛋白支架功能，相對(duì)于常規(guī)的激酶抑制劑產(chǎn)生更好的抑制炎癥反應(yīng)效果。 2.解決方案 本項(xiàng)成果涉及一類可以降解IRAK4蛋白的小分子降解劑，可以同時(shí)消除IRAK4蛋白的激酶功能和支架蛋白功能。相較于小分子抑制劑，該類小分子降解劑有更強(qiáng)的抑制炎癥反應(yīng)的效果。有望用于開(kāi)發(fā)新型、高效、新機(jī)制的抗炎小分子藥物，同時(shí)拓展該類分子在癌癥治療中的作用。 PROTAC是一種具有雙功能的雜合小分子，通過(guò)合適的連接鏈將靶蛋白配體與E3泛素連接酶配體連接，促使目的蛋白（POI）與E3連接酶形成三元復(fù)合物，從而使靶蛋白接近泛素化系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)靶蛋白的泛素化，隨后被蛋白酶體的26S亞基識(shí)別，最終導(dǎo)致靶蛋白降解。 合作需求 項(xiàng)目合作開(kāi)發(fā)、落地空間、研發(fā)團(tuán)隊(duì)或第三方資金投入。

本發(fā)明涉及一種消除發(fā)酵豆粕中β?伴大豆球蛋白的方法。該方法包括如下步驟：(1)調(diào)節(jié)豆粕的含水量在20％～25％(重量比)；(2)用110℃～125℃的蒸汽處理步驟(1)得到的豆粕，出料、冷卻；(3)對(duì)步驟(2)得到的豆粕接種酵母菌和屎腸球菌，調(diào)節(jié)接種物料的含水量在38％～42％(重量比)；(4)對(duì)步驟(3)得到的豆粕進(jìn)行厭氧發(fā)酵。本發(fā)明能夠顯著地降低

現(xiàn)有伴隨診斷主要是基因檢測(cè)，而基因突變并不等于蛋白質(zhì)表達(dá)，更不意味著靶點(diǎn)激活。本項(xiàng)目基于蛋白組學(xué)，特異性捕獲磷酸化酪氨酸激酶（最主要靶點(diǎn)），直接檢測(cè)靶點(diǎn)激活狀態(tài)，極低成本為腫瘤用藥提供最精準(zhǔn)指導(dǎo)。

本發(fā)明涉及一種新型的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)細(xì)胞水平篩選系統(tǒng)及其構(gòu)建方法與應(yīng)用。所述篩選系統(tǒng)由HEK293細(xì)胞或CHO細(xì)胞構(gòu)建，含有來(lái)自以下序列中不同組間基因序列構(gòu)建的2種融合表達(dá)載體：第1組：(1)DnaE基因的C端與報(bào)告基因的C端的拼接序列：DnaE-C-Report-C，(2)DnaE基因的N端與報(bào)告基因的N端的拼接序列：Report-N-DnaE-N；第2組：①GPCR基因，②β-arrestin基因。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：應(yīng)用本發(fā)明篩選系統(tǒng)進(jìn)行G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)細(xì)胞水平篩選，靈敏度高、特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單、快速，檢測(cè)范圍廣，對(duì)任何靶細(xì)胞型中任何GPCR或GPCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激動(dòng)劑、拮抗劑都可以篩選。

真菌疏水蛋白具有自我裝配成膜的性質(zhì)，因此 （1）疏水蛋白可作為蛋白和細(xì)胞固定化的媒介，可用于生物傳感器和生物芯片，作為引發(fā)層，交聯(lián)上配體或形成融合蛋白，能使特定分子固定化到特定表面。 （2）它能改變表面的屬性，保護(hù)表面?？捎糜谔岣哚t(yī)學(xué)器官移植物生物相容性和防止微生物細(xì)胞粘附；可應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)中燒傷、創(chuàng)傷的創(chuàng)面保護(hù)，為臨床病人創(chuàng)面保護(hù)和恢復(fù)提供一種安全無(wú)毒、操作簡(jiǎn)便、高效低耗的新手段。 （3）作為一種生物表面活性劑，疏水蛋白還可以用于促進(jìn)土壤中的污染物的降解和應(yīng)用在石油泄漏后回收石油的過(guò)程中。 （4）疏水蛋白具有表面活性，可用于食品對(duì)抗相變能力并形成穩(wěn)定泡沫，使其在密封食品生產(chǎn)上發(fā)揮重要作用； （5）也可用于日用化妝品生產(chǎn)中，因疏水蛋白可以作為洗潔產(chǎn)品的成分，根據(jù)其疏水、親水兩相間的轉(zhuǎn)變，可通過(guò)自我裝配而將面部的油脂等疏水的成分包裹起來(lái)，再用水清洗將其除去，也可以作為保護(hù)秀發(fā)的天然膜，使發(fā)部維持清潔并保持一定水分；將它運(yùn)用到面部的美容護(hù)理，由于它的特性，能使皮膚表面形成一層天然生物活性保護(hù)膜，起到皮膚保濕、免受外界空氣中污濁物的侵害，從而達(dá)到護(hù)膚美容之功效。 （6）疏水蛋白直接包裹藥物以改變藥物溶解性并實(shí)現(xiàn)控、緩釋。通過(guò)真菌疏水蛋白與難溶于水的藥物混合，可以達(dá)到良好的分散效果，并延長(zhǎng)了兩種藥物的藥效持續(xù)時(shí)間。 （7）真菌疏水蛋白與其他的功能性蛋白或小肽組成融合蛋白，同時(shí)發(fā)揮疏水蛋白的穩(wěn)定吸附材料表面的特性和功能性蛋白或小肽的特異性功能，如在組織工程、抗炎抗菌材料等。 項(xiàng)目特色： 純天然生物制品，無(wú)毒害，無(wú)污染。耐酸堿，抗相變能力強(qiáng)。自我裝配形成有活性的蛋白膜。具有良好的熱穩(wěn)定性和透氣不透水性。由于它的特性，使得它具有：（1）自動(dòng)成膜，無(wú)需貼敷，使用便利；（2）透氣性優(yōu)良；(3)純天然無(wú)化學(xué)添加成分，瑞氏木霉已被證明是安全的菌種；（4）組織相容性好，避免了嚴(yán)重的排異反應(yīng)；（5）耐高溫（100 攝氏度仍保持活性），易于消毒；（6）穩(wěn)定不降解，便于產(chǎn)品的長(zhǎng)期保存；（7）用表面活性劑就可以很容易地清洗（8）延展性好，1 毫克的疏水蛋白在液面就可以展開(kāi) 1 平方米的薄膜（9）透明，可直接透過(guò)成膜觀察（10）性價(jià)比高。 市場(chǎng)應(yīng)用前景： 目前國(guó)際上尚未實(shí)現(xiàn)疏水蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)，其相關(guān)應(yīng)用產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)更為滯后。我們?cè)谝褜?shí)現(xiàn)疏水蛋白中試研發(fā)的基礎(chǔ)上，擴(kuò)大發(fā)酵規(guī)模，進(jìn)行后續(xù)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，我們的技術(shù)和工藝現(xiàn)居國(guó)際領(lǐng)先地位，無(wú)疑會(huì)占有寶貴的先機(jī)。 疏水蛋白產(chǎn)品將作為新一代膜生物活性材料進(jìn)入市場(chǎng)，它的出現(xiàn)將會(huì)革命性地取代現(xiàn)有化學(xué)產(chǎn)品，這無(wú)疑給人類的健康帶來(lái)了很大的益處，消除人類在預(yù)防和治療疾病、食品加工、以及醫(yī)學(xué)檢測(cè)、食物保鮮方面為健康做出努力的同時(shí)給自身帶來(lái)的潛在危害，而且價(jià)格更為低廉。因此，本項(xiàng)目大規(guī)模生產(chǎn)疏水蛋白及其應(yīng)用開(kāi)發(fā)是有非常廣闊的市場(chǎng)前景的，并且我們的技術(shù)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)市場(chǎng)處于領(lǐng)先地位。這些產(chǎn)品都將在國(guó)際市場(chǎng)上處于最優(yōu)競(jìng)爭(zhēng)狀態(tài)。