基于可切割自聚集標(biāo)簽的多肽表達(dá)純化方法
01. 成果簡介 本項(xiàng)成果提供了一種多肽的合成方法,利用了自聚集短肽誘導(dǎo)目標(biāo)多肽的聚集,使得生物合成的多肽以沉淀形式保護(hù)下來,從而避免降解;然后通過體外切割,獲得目標(biāo)多肽,優(yōu)化了多肽合成和分離的工藝,操作簡便且不受多肽的長度限制,有望為多肽藥物的高效制備提供一種解決方案。 具體的,在目標(biāo)多肽的N端或C端融合一段自聚集短肽,這兩者之間采用一個(gè)連接肽將兩者融合。這個(gè)連接肽可以是化學(xué)切割、酶切割的識(shí)別序列或自切割肽(內(nèi)含肽)。通過分子克隆,將這三段肽(目標(biāo)肽、連接肽、自聚集短肽)克隆并轉(zhuǎn)化至表達(dá)菌株(如大腸桿菌BL21(DE3))中進(jìn)行表達(dá)。隨后通過離心或過濾收獲菌體,利用高壓、超聲波等技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞破碎;再通過離心或過濾收集不可溶部分(聚集體);在簡單洗滌后,根據(jù)所選的連接肽的屬性進(jìn)行切割,如化學(xué)切割,蛋白酶切割或誘導(dǎo)自切割;再通過離心或過濾去除不可溶部分,收集上清即可得到粗純多肽產(chǎn)品。如下圖所示: 02. 應(yīng)用前景 基于本項(xiàng)技術(shù)可以合成糖尿病仿制藥利拉魯肽、矮小癥仿制藥生長激素(hGH)等。03. 知識(shí)產(chǎn)權(quán) 相關(guān)成果已授權(quán)3項(xiàng)中國發(fā)明專利及1項(xiàng)美國專利。04. 團(tuán)隊(duì)介紹 團(tuán)隊(duì)主要研究領(lǐng)域?yàn)楹铣缮飳W(xué)和生物制藥(包括他汀類化學(xué)藥物和多肽藥物),負(fù)責(zé)人林章凜博士為教授、博士生導(dǎo)師,教育部長江學(xué)者,廣東省“珠江人才計(jì)劃”科技領(lǐng)軍人才。先后承擔(dān)973、863、國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃專項(xiàng)、國家自然科學(xué)基金等科研項(xiàng)目,發(fā)表SCI論文50余篇,申請(qǐng)專利20余項(xiàng)。05. 合作方式 商務(wù)合作。06. 聯(lián)系方式 lijiaoli2016@tsinghua.edu.cn biyangxf@scut.edu.cn
清華大學(xué)
2021-04-13