一種構(gòu)建多位點(diǎn)突變重組表達(dá)質(zhì)粒的高效方法
本發(fā)明公開了一種構(gòu)建多位點(diǎn)突變重組表達(dá)質(zhì)粒的高效方法,包括如下步驟:將表達(dá)質(zhì)粒pHAT2用雙酶切方法采用兩種限制性內(nèi)切酶NcoI和XhoI酶切產(chǎn)生帶有粘性末端5’?CATG?3’和5’?AGCT?3’線性片段,回收線性化質(zhì)粒片段備用;PCR引物設(shè)計(jì);進(jìn)行三輪PCR反應(yīng)得到突變表達(dá)載體;進(jìn)行連接反應(yīng);構(gòu)建突變表達(dá)載體。本發(fā)明具有突變率高、簡單易行的特點(diǎn)。
青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
2021-04-13