一種高效快速構(gòu)建豬腸道冠狀病毒重組病毒的方法
本發(fā)明屬于動(dòng)物傳染病防制技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種高效快速構(gòu)建豬腸道冠狀病毒重組病毒的方法。利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對(duì)含有PEDV AJ1102株全長(zhǎng)cDNA的BAC質(zhì)粒進(jìn)行切割,再通過同源重組方式獲得EGFP基因替換PEDV AJ1102株ORF3基因的重組BAC質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染細(xì)胞后拯救出重組病毒rAJ1102?△ORF3?EGFP。由于不同的豬腸道冠狀病毒具有相似的基因組結(jié)構(gòu)與復(fù)制策略,本發(fā)明也適合于其它豬腸道冠狀病毒重組病毒的構(gòu)建。與傳統(tǒng)方法相比,本發(fā)明具有靶點(diǎn)選擇寬泛,特異性強(qiáng),操作簡(jiǎn)單,效率高和實(shí)驗(yàn)周期短等突出優(yōu)點(diǎn),在一周之內(nèi)便可獲得重組病毒,是一種高效快速構(gòu)建豬腸道冠狀病毒重組病毒的方法。
(注:本項(xiàng)目發(fā)布于2019年)
華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
2021-04-11