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γ-聚谷氨酸（Poly-γ-glutamic acid）是一種重要的天然聚合物，由 于其具有良好的性質已被廣泛應用于食品，化妝品，醫藥，材料等領 域。解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）LL3 是一株谷氨酸 非依賴型 γ-PGA 合成菌。為了提高其 γ-PGA 產量，項目組采用無痕 基因編輯技術對菌株進行了代謝工程改造。包括三部分：模塊化代謝 通路改造；蔗糖代謝途徑改造；谷氨酸合成途徑改造。 B. amyloliquefaciens LL3 是項目組從發酵食品中分離得到，它能 夠從蔗糖出發合成 γ-PGA。利用模塊化通路改造策略對 γ-PGA 合成 相關的八個代謝通路進行改造包括：γ-PGA 降解相關途徑；細胞呼吸 鏈；胞外蛋白及胞外蛋白酶合成途徑；細菌多糖合成途徑；次級小分 子代謝產物合成途徑；細胞自誘導因子合成途徑；谷氨酸合成途徑以 及 γ-PGA 合成途徑。最終整合獲得的最優基因工程菌株 NK-anti-rocG （敲除了 epsA-O 操縱子（負責胞外多糖合成），sac 操縱子（負責果 聚糖合成），lps（脂多糖合成相關），pta（乙酸合成相關），pgdS（γ-PGA 降解酶），cwlO（細胞壁水解酶），luxS（AI-2 合成）以及表達 anti-rocG sRNA（抑制谷氨酸脫氫酶表達））γ-PGA 搖瓶發酵產量從 3.8 g/L 提高到 11.04 g/L，較對照菌株提高了 2.91 倍。γ-PGA 產物純度也 從 78.6%提高到 95.2%。5-L 罐補料分批發酵實驗得到 NK-anti-rocG 菌株產量可達 20.3 g/L。分子量 450,000 Dal，純度 95%以上。 項目特色： 1. 菌種（Bacillus amyloliquefaciens）LL3 是谷氨酸非依賴型 γ-聚谷 氨酸合成菌株；發酵生產主要原料為蔗糖； 2. 補料分批發酵產量為：20.3 g/L。 3. 授權專利號為：ZL200810053900.7 市場應用前景： γ-聚谷氨酸（Poly-γ-glutamic acid）是一種重要的天然聚合物，由 于其具有良好的性質已被廣泛應用于食品，化妝品，醫藥，材料等領 域。本項目采用谷氨酸非依賴型 γ-聚谷氨酸合成菌做為發酵菌種，以 蔗糖為原料發酵法生產 γ-聚谷氨酸，可產生巨大的經濟效益和社會效 益。

項目簡介 作為一種主要的蛋白質翻譯后修飾，賴氨酸側鏈乙酰化及乙酰賴氨酸側鏈去乙?；?已在近年證明能有效地調節多個關鍵生命過程，并且也已證明是發展人類疾病藥物（特 別是癌癥）的新型生物靶點。本成果發展了兩個 Fmoc 保護的乙酰賴氨酸類似物（即 Fmoc硫乙酰賴氨酸和 Fmoc-甲磺酰賴氨酸）的有效制備方法及其成功應用于基于 Fmoc 化學的 固相多肽合成。本課題組的前期工作已表明含有這兩個乙酰賴氨酸類似物的肽及肽類化 合物能作為發展下一代抗癌藥物的全新起點以及作為更近一步研究蛋白質乙

用本方法制出的反芻動物飼料添加劑瘤胃保護性賴氨酸鹽酸鹽微膠囊包衣產品，可減少了賴氨酸在瘤胃中的降解，增加了小腸中賴氨酸的數量，克服了賴氨酸鹽酸鹽防潮性能差和存貯不便的缺點。本方法具有時間短、包衣效率高、制粒均勻等優點。

成果描述：酶脫毛是一種公認的制革脫毛清潔工藝，在中國的豬皮制革中獲得了成功的應用，但一直沒有成功用于牛皮制造。已經報道的牛皮的酶脫毛工藝通常是在35℃至42℃的較高溫度下進行，由于組織及纖維結構的差異，較高溫度下牛皮膠原纖維容易受到破壞，容易發生松面、毛孔擴大等質量缺陷，甚至導致爛面等嚴重質量事故，并且在該溫度條件下實施牛皮酶脫毛，工藝操作和控制難度極大。本技術提供了一種針對牛皮的低溫酶脫毛工藝，并且完全不使用硫化物。該工藝技術使用與之配套的脫毛酶制劑，能夠在較低溫度下對牛皮進行脫毛處理，解決了長久以來本領域技術人員一直渴望解決但始終未獲得成功的牛皮酶脫毛制革的技術難題，并且產生的含蛋白廢水可以替代部分氮肥直接用于農業或城市綠化的灌溉，低溫脫毛同時也節約了能源的消耗，降低了生產成本，提高了綜合效益。市場前景分析：牛皮制革廠。與同類成果相比的優勢分析：國際先進。

可以量產/n針對當前工業發展對脂肪酶的大量需求與脂肪酶實際表達水平較低 的技術瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達技術關鍵，建立了真菌脂肪酶高 效表達技術平臺，構建的米根霉脂肪酶基因工程菌 10L 發酵酶活力可達 40,000U/ml 以上，為當前報道的最高水平，具有極強的國際競爭力。產 品可用于油脂水解、轉酯，食品加工、烘焙，生物柴油制備，飼料添加 劑，再生紙脫墨等廣泛用途。建設其發酵生產線預計需要 800-1000 萬元，經濟效益可觀。米根霉脂肪酶可用于油脂水解、轉酯，食品加工、烘焙，生物柴油

油脂精煉過程中，脫膠是非常重要的一步工序，脫膠效果的好壞直接影響到油脂精煉的效率和最終產品的質量。傳統的脫膠方法常存在產品質量不穩定、消耗大、得率低、“三廢”排放量大等問題。酶法脫膠工藝是現代工業生物催化技術在傳統油脂行業中的應用，是對現有化學或物理脫膠工藝的改進，以提高其經濟性和環保性，有著廣泛的發展前景和重要的經濟和社會價值。本技術以自行篩選所得菌株BIT-18表達的磷脂酶為對象，開發了該磷脂酶在大豆油、菜籽油等常見油脂酶法脫膠中的應用，已完成了實驗室工藝優化，建立了適于工廠規模油脂酶法脫膠工藝

糖化酶是糖化工業的重要酶制劑，但生產上的主要問題是：酶活力低、沒有常溫條件下的酶產品（使得糖化工藝中需要消耗大量能源）。利用定向進化技術獲取較低溫度下活力提高數倍~數十倍的新的酶分子、并確定新基因序列，轉化受體菌。 我們的技術優勢：基因分離技術是我們的優勢，已報道全長基因序列15條，在天津基金資助下最近已克隆了糖化酶基因。定向進化是我們目前的主要研究方向之一，在留學回國科研啟動基金資助下對谷胱苷肽-S-轉移酶脫氯活性進行提高，已有研究進展。

全自動酶標儀318C+廣泛用于各大高?？蒲袡C構、技術質量監督局、動植物檢疫及食品飼料行業等，除開展血液學、免疫學、腫瘤免疫學、傳染病免疫學、TORCH感染免疫學、基因檢驗項目外、還可以對食品安全三聚氰胺、黃曲霉素、農藥殘留、獸藥殘留等所有采用酶聯免疫吸附試驗（Elisa）進行項目檢驗，并且有相應版本的軟件支持。   產品特點： 1、內置嵌入式系統，無需外接電腦即可操作、存儲、打印; 2、測量模式：單波長檢測，雙波長檢測，兩點法，動力學法，酶抑制率，終點法、速率法。 3、*可選擇吸光度、Cut-Off定性計算、單點定標、折線回歸、線性回歸、指數回歸、對數回歸、雙對數回歸、log-logit、冪回歸、四參數回歸、酶抑制率等計算方法；  4、在同一板上可進行多至12個不同項目的測試，并可同一板檢測定性和定量項目。 5、*全面完善的質控功能，包含westguard多規則質控，即刻法質控等多種質控圖及質控參數計算，具有質控報警功能。   技術參數： 1、*波長范圍： 400-800nm 2、*濾光片配置：10個濾光片位置，標配405nm、450nm、492nm、630nm,選配6定制波長 3、吸光度范圍：0.000―4.000A 4、*光通道數：8通道光路檢測，另設一個獨立參比通道（選配） 5、示值穩定性：≤±0.002A或≤0.5%T/10min。 6、示值誤差（準確性）：≤±0.005A或±0.2%T。 7、重復性：≤0.2%或≤0.2%T。 8、靈敏度：≥0.01（L/mg）。 9、通道差異：≤0.01A。 10、波長示值誤差：±1nm 11、半寬度：≤8nm 12、分辨率：0.001A（顯示），0.0001A（內部計算） 13、*讀板速度：單波長≤3秒/96孔，雙波長≤6秒/96孔 14、振板功能：速度和時間可調 15、光源類型：進口鹵鎢燈 16、板條類型：標準96孔或其他型酶標板、條 17、適用孔型：平底、U型和V型 18、顯示方式：7寸彩色液晶顯示屏顯示 19、輸入方式：觸摸屏輸入，可選配鼠標和鍵盤 20、打?。簝戎脽崦舸蛴C，可外接打印機 21、數據儲存：200,000個測試數據，500個以上測試項目（可擴展） 22、接    口： USB(A)口、USB(B)口、串口、并口 23、使用環境：溫度5-40℃；濕度15%-80% 24、電源電壓：220V±10%，50/60Hz 25、體積：475mm×350mm×210mm（長×寬×高） 27、重量：11.5Kg

低聚異麥芽糖作為一種健康糖源和功能性食品添加劑廣泛應用于醫藥、食品和飼料添加劑行業中。在低聚異麥芽糖的制備過程中，α-葡萄糖苷酶的轉糖苷作用是關鍵步驟。目前國內用于低聚異麥芽糖生產的α-葡萄糖苷酶大多為進口品。本項目獲得的?-葡萄糖苷酶生產菌株發酵液酶活達到 11 U/mL，為國內外現 有報道中的最高水平，發酵工藝簡單易控。重組菌發酵液經過濾除菌并濃縮后可以直接作為酶液進行轉化。酶轉化生產低聚異麥芽糖轉化率與進口酶相似，可以替代進口品。 

本項目針對上述問題，從分子、細胞和個體水平三個層面上研究人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)生物學行為及相關技術的臨床應用，旨在提高兒童腫瘤療效。 1、主要科技內容和技術特點： 1） 率先在國內外建立RT-PCR和實時定量RT-PCR檢測hTERT法，該法簡便、快速、經濟、安全，適用于臨床推廣應用。該項技術已經應用于兒童惡性腫瘤診斷、監測和指導個體化治療，提高了兒童腫瘤的診療水平。 2）首次在國內外研究體內造血干細胞hTERT的生物學行為，證明了hTERT與促紅細胞生成素的關系，并系統研究了惡性腫瘤細胞hTERT的生物學行為， 探討腫瘤細胞中Aurora A與hTERT及端粒酶表達的相關性，提出hTERT與細胞因子網絡紊亂相互作用促進腫瘤發生和發展的新觀點，為惡性腫瘤在分子水平上的監測和以hTERT為靶點的生物工程治療提供了依據。 3） 在國內外首次闡明端粒酶重建對成纖維細胞遷移能力和生物節律的調控，把端粒酶、hTERT生物學行為和生物節律與腫瘤擇時治療有機結合，為腫瘤治療提供了一條新路徑。實踐證明，在該理論指導下進行化療，可明顯提高腫瘤化療效果，且毒副作用明顯減少。