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本發(fā)明公開了一種蠟樣芽孢桿菌、其篩選方法、制劑及應用。所述蠟樣芽孢桿菌，具有高效土霉素降解能力，按照如下方法篩選：(1)取受土霉素污染的豬糞菌懸液，在含有 400μg/ml 至 500μg/ml 的放線菌酮的培養(yǎng)基中培養(yǎng)出細菌單菌落；(2)不斷提高培養(yǎng)基中土霉素的濃度，保留能適應的細菌單菌落；(3)將上述細菌單菌落，加入無機鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)，不斷提高土霉素濃度，保藏土霉素降解率不低于 50％且 OD600 不低于 0.2 的細菌。所述制劑包括質量比例為 1：4 至 1：5的所述芽孢桿菌干粉和有機基質。所

1.痛點問題 表面活性素是一種枯草芽孢桿菌脂肽，分子結構含7個氨基酸環(huán)肽及13-16個碳鏈長度的脂肪酸，作為脂肽家族生物表面活性劑的代表性分子，具有優(yōu)異的表面/界面活性、穩(wěn)定性及抑菌、殺蟲等性能。因此，其在石油開采、工農業(yè)、醫(yī)藥、日化等領域展現出了非常廣闊的應用前景。 但發(fā)酵產率低嚴重制約了表面活性素的工業(yè)化生產和應用。研究表明，野生菌株的產量通常為1g/L以下。培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化后，產量提高也很有限。菌株的基因工程改造方面也比較困難。表面活性素（脂肽）合成機制為特殊的非核糖體肽合成機制，基因簇很大，長度達到26Kb以上。因此很難實現異源表達，只能進行基因組原位突變改造。其分子結構中既包含氨基酸、也包括脂肪酸，因此代謝途徑也很復雜。此外，發(fā)酵培養(yǎng)過程中，嚴重的起泡和泡沫溢出問題也制約了工業(yè)化的進程。 2.解決方案 化工系于慧敏教授團隊從南海底泥等特殊環(huán)境中篩選獲得了產表面活性素野生枯草芽孢桿菌，進一步采用原位編輯超強啟動子工程、特點氨基酸和脂肪酸代謝工程和營養(yǎng)細胞-芽孢調控綜合策略，成功構建高產表面活性素的無休眠枯草芽孢桿菌超級細胞工廠，并進一步打通了高產表面活性素新工藝，獲得了表面活性素液體和粉末產品。 3.合作需求 本項目尋求有志于在石油開采、工農業(yè)、日化洗滌等不同應用領域進行脂肽（表面活性素）新產品開發(fā)的企業(yè)開展合作，尤其是在上述不同領域具有孵化資源或資金，在工程化、產品化所需的場地、實驗條件等方面具有生產和銷售優(yōu)勢或經驗的企業(yè)。也尋求對不同應用場景具有共同開發(fā)興趣的企業(yè)開展技術合作。最后，也希望與一些高科技園區(qū)進行對接，推動產品生產線建設。

中試階段/n該成果屬于獸用微生物添加劑制備技術應用領域，涉及一株緩解畜禽應激的枯草芽孢桿菌選育及應用。該發(fā)明從禽源分離篩選的對養(yǎng)殖動物常見腸道致病菌如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌具有明顯的抑菌效果的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）HDRaBS1。生物功能驗證表明該菌株具有抗逆性強和抗應激等特點，可用于制備抗畜禽應激的微生物制劑，其中的制劑包括畜禽飼用微生物添加劑。還公開了該枯草芽孢桿菌HDRaBS1的分離鑒定方法及其在畜禽用單菌劑制備中的應用。

胞內寄生性單增李斯特菌和綿羊李斯特菌能在吞噬細胞等抗原遞呈細胞內繁殖，引發(fā)高水平的抗原遞呈作用，分別通過MHCⅠ和Ⅱ類途徑引起宿主抗原特異性的CD8+和CD4+ T細胞免疫反應，建立長期有效的免疫保護記憶，因此可作為一種通用的疫苗載體。本項目以上述兩種李斯特菌為活菌載體搭建新型疫苗構建通用平臺，該平臺具有以下優(yōu)勢：生物安全——敲除了菌株致病基因，降低了毒性；外源蛋白表達穩(wěn)定——外源抗原基因整合至細菌基因組，永遠不會丟失；外源抗原具有分泌性——抗原基因融合有分泌信號肽，使蛋白能分泌到胞外，更有利于免疫刺激；對環(huán)境、公共健康安全——重組疫苗菌株不攜帶耐藥基因，不會給環(huán)境和公共健康帶來危害。本平臺技術目前已獲得授權專利，成果屬于國際先進水平，已在結核疫苗及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的研制上應用。該平臺還可應用于腫瘤治療性疫苗及其他預防病毒和慢性細菌感染的疫苗的研發(fā)，是一種通用的疫苗構建平臺。

從寒假到現在，清華大學天津高端裝備研究院表界面微納技術研究所（以下簡稱清華高端院表界面所）的實驗室里，科研人員已連續(xù)忙碌了好多天。為了趕制捐獻給抗疫醫(yī)務人員的消毒除菌凝膠，留在天津的研究所員工幾乎全部上崗。由于生產線工人沒有復工，這些科研工作者們就成了“臨時工”，實驗室成了“臨時生產線”。“相比傳統(tǒng)噴灑消毒液的方式，緩釋二氧化氯可以實現長期持續(xù)消毒，無死角覆蓋，是一種更好的消毒方式。”清華高端院表界面所常務副所長杜川說。在北京清華長庚醫(yī)院執(zhí)行院長董家鴻院士的建議下，大年初二，高端院應急專項小組緊急集結，針對除菌消毒的應用需求，在之前技術儲備的基礎上，以最快的速度研發(fā)出以緩釋二氧化氯技術為核心的消毒除菌凝膠，為這場特殊戰(zhàn)“疫”提供綠色、安全、長期高效的消毒除菌新手段。經廣東省微生物分析檢測中心檢測，殺菌率達到99.9%。一瓶消毒除菌凝膠可以在10—20平方米的房間使用1—2個月，而且其揮發(fā)濃度僅為美國國家職業(yè)安全衛(wèi)生協會建議暴露限值0.1ppm濃度（parts per million）的三分之一，在保證消殺效果的同時，不會對人體健康產生影響。

該技術利用不同食用菌子實體或加工副產物，制作不同功效的食用菌系列 凍干方便菌湯，適用于食品加工企業(yè)、凍干食品加工企業(yè)、果蔬加工企業(yè)。解 決了生鮮果、菜、菌加工副產物綜合高效利用問題；將生鮮果、菜、菌的營養(yǎng) 與保健功效與糕點、面點相結合，改善和提高了普通糕點及面食制品的營養(yǎng)與 功能；增加了糕點及面食制品的花色品種，以滿足消費者的多樣化需求。該技 術可直接對生鮮果、菜、菌加工副產物進行濕法打漿利用，省去了脫水干燥與 粉碎工序，簡化了工藝流程，降低了加工能耗。通過打發(fā)順序的調整和有關配 料的應用，提高了制品的性能，保護了原料中的營養(yǎng)與功效成分。

本實用新型涉及一種乳酸菌復合菌劑的制備裝置，包括外箱體，外箱體頂部設置有蒸汽接口，外箱體內上部設置有上端開口的原料箱，原料箱通過管道連接有位于其下方的混合箱，混合箱兩端均通過轉軸轉動固定在固定板上，混合箱底部設置有凸輪，凸輪連接有位于外箱體外的驅動裝置，混合箱通過管道連接有菌種箱和培養(yǎng)箱，菌種箱通過管道與培養(yǎng)箱相連，菌種箱連接有伸出外箱體外的接種管，培養(yǎng)箱底部設置有加熱裝置，加熱裝置與控制器相連；本實用新型通過將原料箱、混合箱、菌種箱和培養(yǎng)箱均設置在外箱體內，方便進行蒸汽滅菌消毒，保證培養(yǎng)過程中的無菌無氧環(huán)境，凸輪驅動混合箱搖晃，避免傳統(tǒng)攪拌葉污染培養(yǎng)液的隱患。

本項目涉及功能性醋酸菌/乳酸菌及其發(fā)酵調控技術，可用于果蔬飲品、酵素、新型調味品的發(fā)酵制造。水果、蔬菜等農產品由于其保質期短，運輸成本高，較適宜于在原產地或產地附近進行深加工，以延長保質期及產品附加值。發(fā)酵類果蔬飲品由于經過微生物處理，在口味、質地以及營養(yǎng)成分等方面均得到了顯著改善，其中果蔬類益生菌類發(fā)酵飲品，更是得到關注健康的消費人群的青睞。然而目前市場中的發(fā)酵果蔬汁類產品，魚龍混雜，很多產品存在發(fā)酵程度不高；高度依賴后調配；微生物混亂及發(fā)酵過程控制不科學；食品安全性不能得到保障等問題。 針對這一類型的產品，本項目從發(fā)酵菌種、發(fā)酵工藝、功能成分分析以及產品標準化等方面系統(tǒng)的進行了研發(fā)。 1）豐富的菌種：本課題組擁有近百株背景明確、安全可靠、發(fā)酵性能優(yōu)良 的微生物，形成了完備的釀造用菌種庫，包括乳酸菌、醋酸菌、酵母菌、米曲霉等?？梢葬槍Σ煌陌l(fā)酵原料以及最終產品口感及質構的要求，選擇一種益生菌或復合發(fā)酵菌種，實現個性化的定制需求。 2）科學工藝：通過科學的發(fā)酵工藝及過程控制，實現了乳酸菌等微生物的高密度培養(yǎng)，活菌數可達 100 億/ml。大幅降低生產成本和周期，混菌發(fā)酵可由幾個月縮短至 10 天內，乳酸菌發(fā)酵縮短至 24 小時內。實現高效的物質轉化，總酸可以達到 6%，提高產品品質及生產穩(wěn)定性。 3）成分分析：建立了完備的發(fā)酵產品成分分析技術平臺。針對與產品風味、以及腸道調節(jié)、增強免疫等健康功能緊密相關的有機酸、短鏈脂肪酸、多酚、多肽等功能成分進行精確定量分析以及健康功能評價。 4）產品風味: 本課題組研發(fā)的果蔬發(fā)酵產品口味濃郁、發(fā)酵特色明顯，無不良異味。避免了發(fā)酵后的過度調配及添加劑的使用，即可達到較優(yōu)的感官要求。符合健康、綠色的現代加工食品的需求。 

農業(yè)生產中許多病害發(fā)生、發(fā)展嚴重，目前在生產中仍以化學防治為主，由于田間化學用藥次數的提高，病菌已產生明顯的抗藥性。如番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染引起的，是番茄生產中的主要病害，嚴重影響番茄的產量及品質。由于缺乏抗灰霉病的抗原材料，通過常規(guī)方法很難育成番茄灰霉病的抗性品種。傳統(tǒng)的化學防治不僅高殘留、高污染，且對葉圍有益微生物區(qū)系造成破壞，自然抗病能力進一步減弱。隨著人們生活水平的提高，對番茄等果蔬產品的品質要求越來越高，綠色和有機食品逐漸成為消費市場的主流，市場潛力巨大。在食品安全、環(huán)境保護、農業(yè)可持續(xù)發(fā)展的時代潮流下，研發(fā)新型生物農藥逐步取代化學農藥已成為農業(yè)生產的重要目標，也是經濟和社會發(fā)展的必然趨勢。 利用生防微生物及其次生代謝產物是生物防治的重要手段，我國和世界上許多國家已有商品化微生物農藥產品。目前對于番茄灰霉病的微生物防治研究多數處于實驗室和溫室階段，田間應用的極少，多數菌劑在田間應用過程中防效不穩(wěn)，這是制約微生物菌劑開發(fā)應用的一個瓶頸。此外，多數研究只是針對某一種病害，具有廣譜抗性的菌株很少。本實驗室在土壤中分離出一株新的粉紅粘帚菌（WY-1），初步研究表明，該菌對番茄灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等病原菌均有抑制作用（已獲專利，專利號ZL2009 1 0072862.4）該菌株是可通過多種機制共同作用抑制數種植物病原菌的生防菌，能有效的防治番茄、辣椒等多種作物的灰霉病、葉霉病、枯萎病、黃萎病和綿疫病等，同時具有較好的促生作用，具有一菌多效的特點。其作用機制包括競爭、重寄生、溶菌、拮抗和誘導抗性等。由于該生物制劑是一種廣譜抗性的生防菌劑，對農業(yè)生產具有重要的社會意義。這種以防治番茄灰霉病為主的廣譜性生防菌劑，可以有效的控制保護地生產病害的發(fā)生，在滿足菜籃子需求的基礎上，更保證了有機蔬菜的安全生產。

已有樣品/n公開了一種蘇云金芽孢桿菌及制備方法和應用，保藏編號：CCTCCM2012040。其步驟是:A、利用土壤中蘇云金芽孢桿菌芽孢耐78－82℃高溫以及形成伴胞晶體的特性，采用彈土法分離蘇云金芽孢桿菌；B、以初孵甜菜夜蛾和棉鈴蟲為試蟲，進行毒力生物測定，經過比較毒力致死中量LC50，篩選到高毒力菌株BtCS36。利用正交試驗和小試發(fā)酵，確定了其發(fā)酵培養(yǎng)基配方和發(fā)酵工藝。利用該菌和確定的發(fā)酵工藝發(fā)酵周期為30小時左右，發(fā)酵液對棉鈴蟲的毒力效價達3000-5000IU/μl。生產新型Bt殺蟲劑不僅可