抗肝癌、黑素瘤藥物-重組精氨酸脫亞胺酶的制備
精氨酸脫亞胺酶(Arginine deiminase,EC 3.5.3.6,ADI)因其可以作為 精氨酸營養缺陷型腫瘤細胞(如:肝癌、黑素瘤)的靶向治療藥物而受到廣泛關注。目前,進入癌癥臨床研究的僅有支原體來源的 ADI,處于臨床三期試驗。本項目從自然界篩選到產精氨酸脫亞胺酶的變形假單胞菌,在大腸桿菌實現 了該酶的重組表達,采用該重組 ADI 進行體外和小鼠體內抗癌活性研究,對肝癌細胞人肝癌細胞系 HepG2 和小鼠肝癌細胞系 H22 有顯著抑制作用。基于簡便靈敏的 96 孔板高通量篩選模型,篩選在體內生理條件下具有較高酶活以及底物親和性的精氨酸脫亞胺酶突變株,采用隨機突變、定點突變等非理性和半理性的蛋白質定向進化手段,獲得了最適 pH 由 6.0 提高至 7.0,在生理中性條件下(pH 7.4)酶活力較野生型 ADI 提高了 33 倍以上的 ADI 突變株,比活力為 15-17 U/mg。該改造后的 ADI 的 PEG 化和小鼠實驗正在進行中。
江南大學
2021-04-11