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本發(fā)明公開(kāi)了一種鈣依賴(lài)型蛋白激酶CPK32及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明的鈣依賴(lài)型蛋白激酶CPK32，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其編碼基因的CDS序列如SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)CPK32基因?qū)肽康闹参镏泻竽軌蛘{(diào)節(jié)目的植物的開(kāi)花時(shí)間、調(diào)節(jié)抽薹時(shí)的葉片數(shù)目或調(diào)節(jié)目的植物中FLC的表達(dá)量。本發(fā)明的鈣依賴(lài)型蛋白激酶CPK32對(duì)于改良作物的開(kāi)花時(shí)間具有重要調(diào)節(jié)作用，在作物的種質(zhì)資源改良中具有較大應(yīng)用價(jià)值。

將β-環(huán)糊精和偶氮苯基團(tuán)分別修飾于紫杉醇分子上，利用紫杉醇分子骨架與微管蛋白的特異性結(jié)合能力，以及在紫外和可見(jiàn)光照射下偶氮苯分子與β-環(huán)糊精空腔可逆鍵合的性質(zhì)，來(lái)調(diào)控微管蛋白的聚集狀態(tài)，進(jìn)而影響細(xì)胞活性。光譜實(shí)驗(yàn)表明，含有紫杉醇的偶氮苯分子在溶液中具有優(yōu)異的光致異構(gòu)性質(zhì)、掃描電鏡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，只有在反式偶氮苯修飾紫杉醇和β-環(huán)糊精修飾紫杉醇共同存在下，微管蛋白間才能發(fā)生明顯的聚合現(xiàn)象，同時(shí)微管蛋白的形貌由絲狀聚合物轉(zhuǎn)變成了粒徑較大的球狀納米粒子。通過(guò)對(duì)細(xì)胞染色進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，聚集后的微管廣泛分布在細(xì)胞中，能夠強(qiáng)烈改變細(xì)胞的形態(tài)并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。該工作為調(diào)控生物大分子的聚集行為提供了一種新的策略。

1.簡(jiǎn)介 簡(jiǎn)單介紹項(xiàng)目/成果背景，解決的行業(yè)瓶頸問(wèn)題或行業(yè)共性關(guān)鍵問(wèn)題。 目前核桃加工主要是通過(guò)冷榨法制取核桃油，同時(shí)獲得富含蛋白的核桃粕。由于核桃壓榨時(shí)，一般都不脫除核桃衣，導(dǎo)致了核桃粕的食用性能差，一般只用做飼料。本項(xiàng)目將核桃進(jìn)行脫衣，再通過(guò)水提和分離，實(shí)現(xiàn)油脂體和蛋白的高效分離。在不使用有機(jī)溶劑和酶制劑的條件下，將油脂體加工成核桃油和蛋白-磷脂濃縮物，并同時(shí)制取高純度核桃蛋白。 2.創(chuàng)新要點(diǎn) 介紹本項(xiàng)目的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)，總體水平（處于國(guó)內(nèi)/國(guó)際先進(jìn)/領(lǐng)先水平等）。 （1）除了制取核桃油，還可同步制取蛋白-磷脂濃縮物，可作為天然乳化劑； （2）除了制取上述兩種核桃油脂產(chǎn)品，還可同步制取貯藏性能佳的高純度核桃蛋白粉。 通過(guò)與現(xiàn)有核桃加工技術(shù)的對(duì)比，本項(xiàng)目處于國(guó)際領(lǐng)先水平。 3.關(guān)鍵指標(biāo) （1）每千克核桃仁，可制取580g左右的核桃油，30g左右的蛋白-磷脂濃縮物，100g左右的核桃蛋白粉（蛋白含量80%以上）； （2）蛋白-磷脂濃縮物成分含量：67%中性脂質(zhì)、10%具有極佳乳化性能的膜蛋白、9%核桃蛋白、7%磷脂、7%其它成分（包含鞘氨醇等）； （3）核桃蛋白粉中的精氨酸含量高達(dá)13%，是精氨酸的良好來(lái)源。

蛋白質(zhì)之間的相互作用對(duì)生命活動(dòng)至關(guān)重要。盡管已有不少體內(nèi)研究蛋白互作的方法，但由于許多蛋白互作是高度動(dòng)態(tài)的，因此用傳統(tǒng)的方法難以捕獲。本研究基于“招募”和“聚集”的原理，即將“誘餌”蛋白A錨定在線粒體的外膜上，如B蛋白能與A蛋白互作，則將被“捕獲”到線粒體外膜，發(fā)生富集；如C蛋白不與A蛋互作，則不會(huì)發(fā)生定位變化（圖1）。文章首先用線粒體錨定（Mito-docking）的方法有效驗(yàn)證了G蛋白亞基γ2和β1間的互作，并進(jìn)一步運(yùn)用該方法研究了核轉(zhuǎn)運(yùn)受體（importinαisoforms）與貨物蛋白（經(jīng)典的核定位信號(hào)cNLS）之間的互作，揭示了核轉(zhuǎn)運(yùn)受體-貨物蛋白的識(shí)別特異性

一種類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子(TranscriptionActivatorLikeEffectors，TALE)，其特征在于所述類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子(TALE)能夠與人類(lèi)CCR5基因活性區(qū)域或者CXCR4基因活性區(qū)域中的DNA片段識(shí)別并結(jié)合，所述人類(lèi)CCR5基因活性區(qū)域一共有3個(gè)，所述CXCR4基因活性區(qū)域一共有2個(gè)。TALE與核酸內(nèi)切酶連接形成融合蛋白TALEN，利用該TALEN對(duì)CCR5基因或者CXCR4基因的特定位點(diǎn)進(jìn)行剪切，可以使得進(jìn)行基因調(diào)控后的細(xì)胞具備抵御HIV病毒的能力。

已有樣品/n一種從雞蛋黃中提取分離免疫球蛋白IgY的方法。　　成果簡(jiǎn)介：本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從雞蛋黃中提取分離免疫球蛋白IgY的方法。現(xiàn)有技術(shù)中通常采用水稀釋法、有機(jī)溶劑抽提沉淀法、超濾、超臨界萃取、鹽析、層析等方法提取分離IgY，然而這些方法普遍存在著步驟多、批量小、試劑耗量大和回收率低等問(wèn)題。本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種分離效果好，產(chǎn)品純度高的雞蛋黃免疫球蛋白IgY的提取分離方法。該方法包括先用水稀釋法獲得水溶性組分，再用聚乙二醇沉淀法粗提免疫球蛋白IgY

研發(fā)階段/n一種牛奶中人乳鐵蛋白篩查試紙條及制備方法，該專(zhuān)利技術(shù)可在30分鐘內(nèi)檢測(cè)牛奶中是否有轉(zhuǎn)入的外源人乳鐵蛋白。

本發(fā)明公開(kāi)了一種魚(yú)類(lèi)NKEF-A重組蛋白對(duì)適應(yīng)性體液免疫的活化效應(yīng)及其應(yīng)用，所述的應(yīng)用為用于制備能夠促進(jìn)魚(yú)類(lèi)體液免疫能力的免疫增強(qiáng)劑，所述魚(yú)類(lèi)NKEF-A重組蛋白的氨基酸序列為SEQID?NO:1所示；本發(fā)明提供的NKEF-A重組蛋白作為適應(yīng)性體液免疫增強(qiáng)劑，其優(yōu)點(diǎn)在于：(1)使用劑量小，效率高；以1:100(NKEF-A蛋白:抗原)的NKEF-A重組蛋白劑量即可發(fā)揮顯著的免疫促進(jìn)作用；(2)易于制備免疫混合液：NKEF-A重組蛋白是可溶性蛋白，容易與抗原混合，克服了傳統(tǒng)礦物油乳劑類(lèi)制劑不易乳化抗原的缺點(diǎn)；(3)安全性高；與細(xì)菌毒素或化合物制劑不同，NKEF-A是宿主自身的蛋白，不存在外源物質(zhì)導(dǎo)入產(chǎn)生的潛在毒副作用。

本研究成果是立足我國(guó)蛋白質(zhì)飼料資源短缺、人畜爭(zhēng)糧、畜禽對(duì)飼料蛋白質(zhì)利用率低以及動(dòng)物糞便中含氮物質(zhì)排放污染環(huán)境等現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，開(kāi)展的以提高飼料蛋白質(zhì)消化率、減少糞尿氮排放，和提高飼料蛋白質(zhì)資源利用率為主要目標(biāo)的系列研究，獲 2012 年江蘇省科學(xué)技術(shù)三等獎(jiǎng)。該成果提高反芻動(dòng)物生產(chǎn)率 5-10%、 N 素減排 5-7%。

現(xiàn)有問(wèn)題：現(xiàn)有的血紅蛋白類(lèi)攜氧載體（HBOCs）主要為小分子修飾血紅蛋白、交聯(lián)劑聚合血紅蛋白以及包裹血紅蛋白。這些HBOCs制品的毒副作用在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和I, II, III期臨床試驗(yàn)均有報(bào)道。正是基于臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的HBOCs引起高血壓反應(yīng)及增加病人心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)，2009年美國(guó)FDA拒絕了Northfield公司HBOCs產(chǎn)品（PolyHeme）的上市請(qǐng)求。現(xiàn)有HBOCs制品輸注后的毒副反應(yīng)，主要是由于HBOC中游離或未聚合的血紅蛋白，包括氧合或非氧合狀態(tài)，透過(guò)內(nèi)皮屏障，消耗內(nèi)皮舒張因子一氧化氮（NO）；同時(shí)，血紅蛋白本身的氧化還原反應(yīng)，生成的氧自由基造成機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)。 項(xiàng)目的創(chuàng)新性和優(yōu)越性：? 本項(xiàng)目制備的新型攜氧納米粒子，完全不同于現(xiàn)有HBOCs制品，首先在納米粒子中包裹一定劑量的抗氧化劑，有效減少輸注血紅蛋白氧載體后可能產(chǎn)生的氧自由基。然后，通過(guò)結(jié)合珠蛋白將血紅蛋白穩(wěn)定連接到納米粒子外膜。結(jié)合珠蛋白能與游離血紅蛋白結(jié)合成穩(wěn)定的復(fù)合物，一方面避免了體內(nèi)過(guò)量的游離血紅蛋白出現(xiàn)，減少輸注后縮血管效應(yīng)引起的高血壓現(xiàn)象和胃腸道反應(yīng)；另一方面，結(jié)合珠蛋白本身也可作為還原劑，減少血紅蛋白引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)。?該新型攜氧納米粒子體內(nèi)的代謝方式為納米粒子崩解后，結(jié)合珠蛋白/血紅蛋白復(fù)合物經(jīng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除，可大大減輕經(jīng)腎臟排泄可能造成的腎損傷。?現(xiàn)有HBOCs類(lèi)制品，特別是聚合血紅蛋白和包裹血紅蛋白，往往包含數(shù)量不等的血紅蛋白，分子量處于一定范圍，而且，還有部分游離血紅蛋白或未反應(yīng)血紅蛋白并不能完全清除，這也是產(chǎn)生毒副作用的一大誘因。而本項(xiàng)目的攜氧納米粒子表面帶有數(shù)量可控的活性官能團(tuán)，因此，可實(shí)現(xiàn)血紅蛋白的定點(diǎn)定量結(jié)合，得到分子量穩(wěn)定的終產(chǎn)物。?現(xiàn)有的第三代HBOCs制品，大多用高分子材料將血紅蛋白包裹，輸注入人體后很難避免“突釋”效應(yīng)，出現(xiàn)大量游離血紅蛋白，有可能對(duì)機(jī)體造成很大的傷害。而本項(xiàng)目所述的新型攜氧納米粒子，血紅蛋白與結(jié)合珠蛋白形成了穩(wěn)定的復(fù)合物或者血紅蛋白與高分子材料牢固結(jié)合，即使納米粒子分解之后，也不會(huì)產(chǎn)生大量游離血紅蛋白，因此可大大減少相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。該新型攜氧納米粒子可以?xún)龈煞勰┑男问奖４妫４嫫陂L(zhǎng)，穩(wěn)定性高，運(yùn)輸方便，可滿(mǎn)足各種環(huán)境下的應(yīng)急使用和臨床常規(guī)應(yīng)用。?使用的高分子載體為聚乙二醇-聚酯類(lèi)共聚物。聚乙二醇（PEG）由于其本身不帶電荷、水溶性、無(wú)免疫原性、可以防止材料表面生物污染、減少蛋白質(zhì)吸附和細(xì)菌貼附、并且不易被免疫體系識(shí)別等、且它在體內(nèi)能溶于組織液中，能被機(jī)體迅速排出體外而不產(chǎn)生任何毒副作用的特點(diǎn)，是修飾納米粒子的理想材料。聚乙二醇的存在還可以有效屏蔽人體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)納米粒子的吞噬和排異，延長(zhǎng)粒子在血液中的循環(huán)時(shí)間。可生物降解且生物相容性良好的聚酯（聚己內(nèi)酯/聚乳酸，PCL/PLA），無(wú)毒無(wú)刺激性，已經(jīng)得到美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的認(rèn)證用于人體治療。