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本發明涉及一種綠盲蝽唾液酶中果膠酶與淀粉酶的體外提取測定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營養法提取綠盲蝽唾液酶，并測定綠盲蝽中果膠酶、淀粉酶活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營養介質，利用酶與底物反應的原理，測定綠盲蝽唾液中果膠酶、淀粉酶活性。本方法材料易得，操作簡單方便，制作成本低，占空間小，可實現綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續回收利用。

蛋白酶體是細胞中用來調控特定蛋白質的濃度和清除錯誤折疊蛋白質的主要機制的核心組成部分，是細胞中最普遍的不可或缺的大型全酶超分子復合機器之一，也是迄今為止發現的最大的蛋白降解機器。人源蛋白酶體全酶包含至少64個亞基，由蓋子 (Lid)和基座(Base)亞復合體組成的調控顆粒RP(Regulatory Particle)所激活。2016年，該課題組與其合作者在《美國科學院院刊》報道了人源蛋白酶體的基態近原子分辨的冷凍電鏡結構，以及三個亞納米分辨的RP-CP亞復合體亞穩或過渡態的共存結構，并首次發現其中一個亞穩態構象的CP的底物轉運通道處于開放狀態（見PNAS 2016, 113: 12991-12996）。這一發現被德國馬普所Baumeister課題組及其合作者在2017年的一篇《美國科學院院刊》論文中通過酵母蛋白酶體全酶的冷凍電鏡亞納米精度分析進一步證實、引用和比較（見PNAS 2017, 114, 1305-1310）。然而，在這些工作中，CP開放態的全酶結構離近原子分辨還有較大距離，未能充分揭示人源蛋白酶體全酶的激活后的運動行為。毛有東、歐陽頎課題組及其合作者在前期工作的基礎上，利用他們自主開發的基于統計流行算法的高性能計算軟件ROME（見PLoS ONE 2017, 12:e0182130）與優化的冷凍電鏡處理方法，對ATP-γS結合狀態下的人源蛋白酶體的全酶冷凍電鏡單顆粒數據展開了深入分析，得到了6個共存的動態結構，其中包括3.6埃分辨率的基態結構，3.5埃的開放態CP結構，和三個CP開放態對應的亞穩簡并態全酶4.2埃，4.3埃和4.9埃的結構。另外兩個中間態結構分辨率為7.0埃和5.8埃。三個CP開放態對應的全酶結構的主要差別在于位于RP的AAA-ATPase激酶馬達模塊，伴隨其不同的構象變化，至少有四個ATP-γS分子穩定結合在不同的AAA-ATPase亞基上，為其在不同核酸結合狀態下形成的非穩定動態構象提供了重要證據。該研究首次觀察到位于AAA-ATPase激酶馬達模塊中心的底物轉運通道呈現從螺旋到鞍形不同的拓撲結構變化，為進一步分析底物和蛋白酶體全酶的相互作用奠定了重要基礎。人源蛋白酶體全酶AAA-ATPase馬達模塊中心的底物轉運通道發生大幅度的拓撲變構

懸賞金額：10萬元 發榜企業：深圳市一正科技有限公司 支柱產業集群：生物醫藥與健康產業集群 需求領域：生物工程與檢測技術；輕工和化工生物技術；生物催化與發酵；智能制造裝備 技術關鍵詞：連續流酶催化；酶固定床；酶循環壽命；酯化反應或酰化反應

該液體酶穩定劑通用性強，適用于多種酶制劑，并且通用于未經濃縮的酶液、中空纖維超濾濃縮或膜式超濾濃縮的酶液，都可在室溫保存三個月至八個月，剩余酶活力在80%。具體技術指標為：1．未經濃縮的液體α-淀粉酶，室溫保存9個月，剩余酶活力達80%以上。/line2．中空纖維超濾濃縮的液體α-淀粉酶，室溫保存6個月，剩余酶活力達80%以上。/line3．膜式超濾的液體堿性蛋白酶，室溫保存8個月，剩余酶活力在80%左右。/line4．未經濃縮的液體糖化酶，室溫保存5個月，剩余酶活力接近90%。/line5．經中空纖維超濾濃縮的液體糖化酶，室溫保存3個半月，剩余酶活力接近90%。未經濃縮和膜式超濾的酶液添加穩定劑后的液體酶穩定性明顯好于經中空纖維超濾濃縮的液體酶。因此膜式超濾較好。實驗證明，液體酶添加劑能提高酶的抗變性能力，促進變性酶的復性；不同添加劑之間有協同或拮抗作用，對穩定劑配方的篩選提供了理論依據。/line所用的添加劑價格低廉，來源方便，并具有通用性。主要設備是超濾濃縮裝置及包裝容器。廠房面積約200平方米。可通過技術轉讓或技術入股方式進行合作。

可以量產/n針對當前工業發展對脂肪酶的大量需求與脂肪酶實際表達水平較低 的技術瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達技術關鍵，構建的白地霉脂肪酶 基因工程菌 10L 發酵酶活力可達 11,200 U/ml 以上，目前國際報道的白 地霉脂肪酶表達酶活力約 200U/ml，可見本技術之精湛。產品可以用于生 物柴油制備，不飽和脂肪酸富集，油脂水解、轉酯、酯化，食品加工、 烘焙等廣泛用途。建設其發酵生產線預計需要 800-1000 萬元，經濟效益 可觀。

成果簡介： 本研究提供了一種基于ATP再生系統和雙功能谷胱甘肽合成酶（GshF）的酶法制備谷胱甘肽的方法。在谷胱甘肽合成過程中，經典的酶法是由谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶兩步催化完成的。而 GshF可一步催化谷胱甘肽合成，簡化的反應步驟，且該酶反饋抑制作用小，非常適合應用于酶法合成谷胱甘肽。酶法合成谷胱甘肽需要大量消耗ATP，通過引入高

本發明涉及一種綠盲蝽唾液酶中蛋白酶與纖維素酶的體外提取測定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營養法提取綠盲蝽唾液酶，并測定綠盲蝽中蛋白酶與纖維素酶的活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營養介質，利用酶與底物反應的原理，測定綠盲蝽唾液中蛋白酶、纖維素酶的活性。本方法材料易得，操作簡單方便，制作成本低，占空間小，可實現綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續回收利用。