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本發(fā)明涉及一種利用噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因轉化制備鴨疫里默氏菌前菌影疫苗的方法與應用方法。該方案首先將噬菌體PhiX174的E基因和葡萄球菌核酸酶A基因通過柔性連接臂(Gly4Ser)3連接成串聯(lián)基因，并進一步構建溫控表達載體pBV-E-SN。將pBV-E-SN電擊轉化進入鴨疫里默氏菌原生質體，篩選陽性克隆28℃增菌培養(yǎng)。分離菌體加保護劑后分裝、冷凍干燥。本發(fā)明所制備的活菌疫苗經飲水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激發(fā)體液免疫。

1）檢驗新技術的申報與實施 通過對RVVC病人陰道微生態(tài)的動態(tài)評價，發(fā)現(xiàn)RVVC病人微生態(tài)失衡和動態(tài)變化規(guī)律，為臨床應用抗真菌結合微生態(tài)治療RVVC提供實驗室依據(jù)。陰道微生態(tài)評價對治療的指導意義，得到了越來越多的臨床醫(yī)生的認可，促進了檢驗新技術“陰道微生態(tài)檢查”的申報與實施。2013年底，該新技術增加了圖像采集技術，進一步促進了新技術的實施和發(fā)展。 2）科研的發(fā)展 通過對RVVC患者陰道微生態(tài)動態(tài)變化規(guī)律的研究，為RVVC病人抗真菌結合微生態(tài)治療提供實驗室依據(jù)。項目研究提高了實驗室微生態(tài)學和女性生殖道感染性疾病研究水平，提高了項目組成員科研和技術能力。同時，隨著項目研究的進展，實驗室培養(yǎng)了更多的研究生和規(guī)培生。 3）經濟效益的提高 2013年醫(yī)院陰道微生態(tài)檢查的標本量較2012年增加了708%，2014年1-4月較2013年1-4月同比增長350%，極大地提高了研究單位的經濟效益，并為臨床醫(yī)生女性生殖道感染性疾病的診斷和治療提供了有力的技術支持。圖像采集技術的實施，進一步提高了經濟效益，并更形象直觀地為臨床醫(yī)生提供診斷幫助。

茶葉是我國重要的農產品之一， 也是傳統(tǒng)的大宗出口商品。在茶葉種植中，以氯氝菊酣為主

成果與項目的背景及主要用途： 菌糠是指以棉籽殼、木屑、稻草、玉米芯、甘蔗渣及多種農作物秸稈、工業(yè) 廢料（如酒糟、醋糟、造紙廠廢液及制藥廠黃漿廢液等）為主要原料栽培食用菌 后的廢棄培養(yǎng)基。菌糠主要含有物質是纖維素、半纖維素、木質素、抗營養(yǎng)因子 和少量的蛋白質，這些原料作為培養(yǎng)基栽培食用菌后，通過食用菌菌體的生物固 氮作用、酶解作用等一系列生物轉化過程，粗蛋白質、粗脂肪含量均比不經過食 用菌發(fā)酵前提高二倍以上，纖維素、半纖維素、木質素等均已被不同程度的降解， 其中粗纖維素降低了 50%以上，木質素降低 30%以上，棉酚降低 60%以上，同 時還產生了多種糖類、有機酸類和生物活性物質。據(jù)報道，我國菌糠年產量在 200 萬噸以上大部分當作廢料而被浪費掉，給環(huán)境造成了很大的污染，一些菌糠 可以被用作畜禽飼料，并且用廢棄菌糠來改良土壤可以做到廢物利用、改善環(huán)境， 實現(xiàn)農業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。 我國土壤絕大部分嚴重缺磷、缺鉀，化學肥料中的磷元素和鉀元素在施肥后 很快被固化，不再能夠被植物使用。解磷菌、解鉀菌及固氮菌是生物益生菌肥中 的主要菌株，使用這些土壤益生菌可以提高土壤中植物可利用氮磷鉀的利用率。 如果能夠利用廢棄菌糠大規(guī)模培養(yǎng)這三種菌，制備成為生物菌肥，將會極大的增 211天津大學科技成果選編 加菌糠做為肥料的優(yōu)勢。本項目利用菌糠培養(yǎng)解磷菌、解鉀菌、固氮菌，制備成 為生物菌肥，預期產生極大的經濟效益和社會效益。 技術原理與工藝流程簡介： 本項目擬利用處理后的廢棄菌糠殘渣培養(yǎng)酵母、解磷菌、解鉀菌、固氮菌， 優(yōu)化發(fā)酵條件，提高菌體量，獲得制備微生物菌肥的最佳工藝路線。 天津大學從農業(yè)廢棄物堆肥中篩選出 7 株解磷能力較強的菌株，其中菌株 FL7 表現(xiàn)出較好的解磷效果，F(xiàn)L7 解磷量為 436.63mg/L。該菌株已經于 2010 年 7 月 13 日在中國微生物菌種保藏中心進行保藏（保藏號：CGMCC NO.4008）。 本課題組還從農業(yè)廢棄物堆肥中篩選得到解鉀菌 K3、固氮菌 N1。解鉀菌 K3 解 鉀量達 4.10mg/L、固氮菌 N1 固氮量為 1.81×10—2mol/L。 另外，天津大學已經建立了以菌糠為基質培養(yǎng)解磷、解鉀、固氮菌的發(fā)酵條 件，經過發(fā)酵條件優(yōu)化，制備的菌肥中三種菌的含量達到 48.62×108CFU/g，其 中解磷菌 2.4×108cfu/g，解鉀菌 25.22×108cfu/g，固氮菌 21×108cfu/g，均遠高于 國標。 應用領域：生物、農業(yè)領域 合作方式及條件：具體面議

有很高的食用和藥用價值，是我國傳統(tǒng)的藥用真菌之一。其鮮嫩醇香，肉 質細嫩、潔白如玉、口感獨特、生熟皆可食、食藥兩用、營養(yǎng)豐富。雞樅菌中 含有麥角甾醇類物質及治療糖尿病的有效成份，對降低血糖有明顯效果。并有 抑制人體癌細胞生長的作用。 

戊二醛是一種五碳雙縮醛化合物, 廣泛應用于手術器械的滅菌和環(huán)境物品的消毒及食品餐具的滅菌與消毒等。由于戊二醛本身的內在毒性以及使用不當而造成的健康危害時有發(fā)生。它對皮膚、粘膜與呼吸道有刺激、對部分人群有致敏作用，并可引發(fā)氣喘和炎性或纖維性肺病。此外，戊二醛在畜牧品方面所造成的生產和環(huán)境安全問題也很嚴重。作為一種畜牧生產領域常用的高效消毒劑，戊二醛在防治畜牧養(yǎng)殖常見病害的同時也造成了環(huán)境污染。殘留在土壤中的戊二醛不僅抑制了病原微生物生長，有益微生物的繁殖和生長也受到影響。該成果提供了一株能降解戊二醛的氮假單胞菌，填補了國內戊二醛污染土壤治理的一項空白，利用該菌劑可徹底清除環(huán)境中存在的戊二醛。 該菌株繁殖速度快，擴大培養(yǎng)需要的原料價格低廉，經濟效益好，有廣闊的應用前景，投放市場可產生巨大的經濟效益和社會效益。 轉化條件：微生物菌劑生產無需大面積廠房，有發(fā)酵罐和分裝車間即可投入生產。 成果完成時間：2015年6月

本發(fā)明的目的在于提供了一種裝載具有干擾素誘導活性的聚肌胞苷酸，并加入殼寡糖作為佐劑的鴨疫里默氏菌菌影疫苗。該方案首先構建溫控表達載體，電轉化入鴨疫里默氏菌原生質體，篩選陽性克隆后28℃增菌培養(yǎng)，然后42℃誘導裂解基因的表達，待OD600不再降低時，加入聚賴氨酸繼續(xù)作用以充分裂解活菌，然后離心分離菌體。將干燥菌體與6mg/mL的聚肌胞溶液等比例混合，使聚肌胞包埋進入菌影內，然后加入2%殼寡糖水溶液攪拌形成均一的混合物，分裝于西林瓶，冷凍干燥，即得到鴨疫里默氏菌新型菌影疫苗。本發(fā)明所制備的菌影疫苗經飲水免疫，既可以刺激呼吸道和消化道黏膜的局部免疫，也可以激發(fā)體液免疫，對機體的保護效果與注射免疫無明顯差異。

1.微電腦控制,中文界面,液晶顯示,觸摸鍵操作,簡潔、直觀、方便。全程電腦自動控制，開機自動加熱并恒溫。2.分攤片、烤片、烘片三個功能區(qū)。3.溫度控制：0-99　℃預設，恒溫精度±１℃

技術分析（創(chuàng)新性、先進性、獨占性） （1）耐藥菌感染已經成為危害公共安全和人類健康的重大疾病 近年來，隨著抗菌藥物的增加和廣泛應用，細菌耐藥性問題日益突出，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、耐青霉素肺炎鏈球菌(PRSP)、耐萬古霉素腸球菌(VRE)、產超廣譜β-內酰胺酶(ESBL)腸桿菌、多種耐藥性結核桿菌(MDRMT) 等超級耐藥致病菌相繼產生和擴散，嚴重危害公共安全和威脅人類健康，減少耐藥菌株的生成和研制新的抗菌藥物不僅成為醫(yī)藥界必須解決的重大問題，而且引起了國際社會和各國政府的高度關注。2014年，WHO首次發(fā)布了全球抗生素耐藥報告；2016年，聯(lián)合國在紐約聯(lián)合國總部召開“抗生素耐藥性問題高級別會議”，WHO再次發(fā)布報告，全面審視了全球的耐藥菌情況。2016年在杭州舉行的二十國集團（G20）領導人峰會，專門提出要推動全球應對抗生素耐藥性問題。美國、中國等國家高度重視耐藥菌的危害和防控，美國政府2015年制定了為期5年的抗擊耐藥細菌國家行動計劃；中國政府制定了《遏制細菌耐藥國家行動計劃（2016 —2020 年）》。耐藥菌感染，已經成為危害世界公共安全和人類健康的重大疾病。 （2）中醫(yī)藥防治感染性疾病具有確切的療效和明顯的優(yōu)勢 感染性疾病在中醫(yī)典籍中常被稱為外感疾病，有外感熱病、傷寒、溫病、溫疫等稱謂。幾千年來，中醫(yī)藥為中國人民的健康，尤其是在預防和控制感染疾病方面做出了重大貢獻。中藥藥效物質研究是中藥實現(xiàn)現(xiàn)代化和國際化的突破口，《“十三五”中醫(yī)藥科技創(chuàng)新專項規(guī)劃》明確了中藥藥效物質研究是國家中長期重點關注的內容之一，強調發(fā)展前沿關鍵技術與創(chuàng)新方法的重要性；同時要求在中醫(yī)藥原創(chuàng)思維的指導下，加強系統(tǒng)生物學、合成化學、大數(shù)據(jù)等多學科前沿技術與中醫(yī)藥的深度交叉融合，促進中醫(yī)藥研究策略的優(yōu)化和復雜系統(tǒng)研究方法學上的變革，解決當前中醫(yī)藥的研究瓶頸問題。 （3）項目建立了中藥防治耐藥菌創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)新模式 項目建立了以“方-病證-菌”、“藥-病證-菌”、“有效部位-病證-菌”、“有效成分-病證-菌”和“結構-網(wǎng)絡-靶標”的中藥防治耐藥菌創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的新模式，建立了抗耐藥菌創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)與評價的技術體系和平臺，為解決日益嚴重的細菌耐藥性問題提供新思路、建立新體系、開發(fā)新藥物。 抗耐藥菌創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)新平臺 項目建立中藥防治耐藥菌創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)新模式，基于計算機輔助設計的防治耐藥菌創(chuàng)新中藥發(fā)現(xiàn)；基于高通量高內涵篩選的防治耐藥菌創(chuàng)新中藥發(fā)現(xiàn)；基于網(wǎng)絡藥理學的防治耐藥菌創(chuàng)新中藥發(fā)現(xiàn)；基于新靶點的防治耐藥菌創(chuàng)新中藥發(fā)現(xiàn)，突破了中藥防治耐藥菌新品種的評價技術：基于病證菌模型的創(chuàng)新中藥評價；基于毒效整合的創(chuàng)新中藥評價。 （4）篩選出中藥防治耐藥菌候選藥物兩個 ① 基于“方-病證-菌”、“藥-病證-菌”、“有效部位-病證-菌”理念篩選出中藥五類新藥1個-廣藿香油 通過前期對大量中藥方劑抗耐藥菌活性進行篩選，發(fā)現(xiàn)廣藿香在大量具有抗耐藥菌活性的中藥方劑中都有出現(xiàn)，初步活性測試也表明，中藥廣藿香具有較強的抗耐藥菌效價。進一步研究還發(fā)現(xiàn)廣藿香水提物和醇提物的抗耐藥菌效果遠不如廣藿香油，因此廣藿香油是廣藿香抗耐藥菌活性的有效部位。 廣藿香油的藥效學研究 針對廣藿香油能“芳香化濕”治療陰道炎的臨床應用，我們通過構建家兔陰道炎模型、大小鼠陰道炎模型、原發(fā)性痛經模型、斑馬魚血管損傷模型、多種動物離體子宮模型等，通過細菌篩選、細胞篩選等試驗平臺，借助超高分辨率激光共聚焦顯微鏡、高內涵成像系統(tǒng)、流式細胞儀等先進設備對廣藿香油治療陰道炎的物質基礎、量效關系、藥理作用機理等進行了研究，表明廣藿香油對于陰道炎具較好的治療效果。隨后項目對廣藿香油栓劑的制備工藝、質量標準草案等進行了研究制定，并對藥理作用與毒理進行了評價。 ② 基于“有效成分-病證-菌”理念篩選出抗耐藥菌新藥1個-廣藿香酮共軛取代衍生物（CDPC-B7）片劑 廣藿香酮是廣藿香油的有效成分之一，具有多種生物活性，包括胃腸道調節(jié)功能、抗炎和抗菌等作用。經實驗證明，廣藿香酮能夠抑制白色念珠菌（Candida albicans）、新型隱球菌（Cryptococcus neoformans）、黑根霉菌（Rhizopus nigricans）和其他真菌，體內研究表明對大腸埃希菌（E. coli）和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）均有抑制作用。而且，廣藿香酮單體對棒狀桿菌和金黃桿菌的最小抑菌濃度小于0.098 μg/mL。經藥代動力學研究表明，廣藿香酮具有良好的口服吸收效果。 為了進一步優(yōu)化藥物抑菌療效，降低毒副作用，我們利用分子對接以及網(wǎng)絡藥理學等方法，研究了廣藿香酮復雜的抗菌作用機制和抗菌作用的靶點。并通過基于靶點藥物設計方法，針對性的設計了一類能與靶點緊密結合的廣藿香酮創(chuàng)新衍生物，并通過借助有機合成方法學手段對化合物合成工藝進行了設計和優(yōu)化，實現(xiàn)了創(chuàng)新廣藿香酮衍生物庫的構建。隨后通過抗菌活性驗證、片劑制備工藝、質量標準草案等進行了研究制定，并對藥理作用與毒理進行了評價。

該技術屬于微生物農藥行業(yè)，使用的是專利菌種，制備工藝重 點解決了黃色籃狀菌分生孢子的發(fā)酵培養(yǎng)和與普通助劑生物相容性差的技術難 題，目前國內沒有相關制劑研究和開發(fā)。本技術優(yōu)化了發(fā)酵條件，在配方中選 用了生物相容性好的助劑和保護劑，產品穩(wěn)定性好。生產加工操作相對容易； 黃色籃狀菌可濕性粉劑具備制劑穩(wěn)定，使用、貯存及運輸方便等特點。黃色籃 狀菌可濕粉劑對花生、棉花等多種作物土傳病害防效顯著，防治對象不容易產青島農業(yè)大學科技成果介紹 2017 －57－ 生抗藥性，對人畜及天敵安全，是生產無公害農產品的首選藥劑，經在花生和 棉花上應用，盆栽試驗防病效果 85%以上；田間試驗防病效果 60%以上，增產 10% 以上。