可遺傳編碼的組蛋白光交聯標簽
組蛋白的翻譯后修飾對于表觀遺傳調控及多種生物學過程具有重要意義。一系列新的賴氨酸化學修飾(如巴豆?;?、琥珀?;龋┱故境鼋M蛋白修飾前所未有的多樣性及動態變化特征??蛇z傳編碼的光交聯探針已經成為研究活細胞內蛋白-蛋白相互作用的重要工具,成功地將該技術拓展到組蛋白的化學修飾研究中,開發了可遺傳編碼的組蛋白光親和標簽,將會極大地推動組蛋白化學修飾的識別機制和功能研究。?該技術的設計包括兩個部分:a)一套帶有翻譯后修飾的賴氨酸遺傳編碼系統,可以在特定位點插入帶修飾的賴氨酸。此外,在賴氨酸的主鏈上還帶有光交聯基團,可在UV光下與修飾相關的蛋白發生共價交聯,可以用于研究該修飾特定的效應蛋白。b)一套帶有保護基團的賴氨酸遺傳編碼系統,保護基團可以在大腸桿菌自身的還原性環境中發生脫除,將帶有光交聯基團的賴氨酸定點插入到組蛋白當中,用于證實交聯到的效應蛋白的特異性。該團隊以巴豆?;揎棡榇?,發展了該技術對應的賴氨酸巴豆酰化修飾的光交聯探針(K*cr)和帶有保護基團的光交聯探針(PNBK*)兩個探針,將這兩種探針分別引入到組蛋白H3的56位和79位,并通過光交聯基團捕捉到了H3上79位巴豆?;娜ヒ阴;窼irt3。
北京大學
2021-04-11