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本發(fā)明涉及一種綠盲蝽唾液酶中蛋白酶與纖維素酶的體外提取測(cè)定方法，利用Paraflim膜，采取膜夾營(yíng)養(yǎng)法提取綠盲蝽唾液酶，并測(cè)定綠盲蝽中蛋白酶與纖維素酶的活性，Paraflim膜法提取綠盲蝽唾液酶利用Paraflim膜、膠卷盒、紗布、橡皮筋、位于兩層Paraflim膜間的液體營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)，利用酶與底物反應(yīng)的原理，測(cè)定綠盲蝽唾液中蛋白酶、纖維素酶的活性。本方法材料易得，操作簡(jiǎn)單方便，制作成本低，占空間小，可實(shí)現(xiàn)綠盲蝽唾液酶的大量、批量提取，并且綠盲蝽可繼續(xù)回收利用。

成果描述：酶脫毛是一種公認(rèn)的制革脫毛清潔工藝，在中國(guó)的豬皮制革中獲得了成功的應(yīng)用，但一直沒(méi)有成功用于牛皮制造。已經(jīng)報(bào)道的牛皮的酶脫毛工藝通常是在35℃至42℃的較高溫度下進(jìn)行，由于組織及纖維結(jié)構(gòu)的差異，較高溫度下牛皮膠原纖維容易受到破壞，容易發(fā)生松面、毛孔擴(kuò)大等質(zhì)量缺陷，甚至導(dǎo)致?tīng)€面等嚴(yán)重質(zhì)量事故，并且在該溫度條件下實(shí)施牛皮酶脫毛，工藝操作和控制難度極大。本技術(shù)提供了一種針對(duì)牛皮的低溫酶脫毛工藝，并且完全不使用硫化物。該工藝技術(shù)使用與之配套的脫毛酶制劑，能夠在較低溫度下對(duì)牛皮進(jìn)行脫毛處理，解決了長(zhǎng)久以來(lái)本領(lǐng)域技術(shù)人員一直渴望解決但始終未獲得成功的牛皮酶脫毛制革的技術(shù)難題，并且產(chǎn)生的含蛋白廢水可以替代部分氮肥直接用于農(nóng)業(yè)或城市綠化的灌溉，低溫脫毛同時(shí)也節(jié)約了能源的消耗，降低了生產(chǎn)成本，提高了綜合效益。市場(chǎng)前景分析：牛皮制革廠。與同類成果相比的優(yōu)勢(shì)分析：國(guó)際先進(jìn)。

可以量產(chǎn)/n針對(duì)當(dāng)前工業(yè)發(fā)展對(duì)脂肪酶的大量需求與脂肪酶實(shí)際表達(dá)水平較低 的技術(shù)瓶頸，突破了脂肪酶超高效表達(dá)技術(shù)關(guān)鍵，建立了真菌脂肪酶高 效表達(dá)技術(shù)平臺(tái)，構(gòu)建的米根霉脂肪酶基因工程菌 10L 發(fā)酵酶活力可達(dá) 40,000U/ml 以上，為當(dāng)前報(bào)道的最高水平，具有極強(qiáng)的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力。產(chǎn) 品可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯，食品加工、烘焙，生物柴油制備，飼料添加 劑，再生紙脫墨等廣泛用途。建設(shè)其發(fā)酵生產(chǎn)線預(yù)計(jì)需要 800-1000 萬(wàn)元，經(jīng)濟(jì)效益可觀。米根霉脂肪酶可用于油脂水解、轉(zhuǎn)酯，食品加工、烘焙，生物柴油

油脂精煉過(guò)程中，脫膠是非常重要的一步工序，脫膠效果的好壞直接影響到油脂精煉的效率和最終產(chǎn)品的質(zhì)量。傳統(tǒng)的脫膠方法常存在產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定、消耗大、得率低、“三廢”排放量大等問(wèn)題。酶法脫膠工藝是現(xiàn)代工業(yè)生物催化技術(shù)在傳統(tǒng)油脂行業(yè)中的應(yīng)用，是對(duì)現(xiàn)有化學(xué)或物理脫膠工藝的改進(jìn)，以提高其經(jīng)濟(jì)性和環(huán)保性，有著廣泛的發(fā)展前景和重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值。本技術(shù)以自行篩選所得菌株BIT-18表達(dá)的磷脂酶為對(duì)象，開(kāi)發(fā)了該磷脂酶在大豆油、菜籽油等常見(jiàn)油脂酶法脫膠中的應(yīng)用，已完成了實(shí)驗(yàn)室工藝優(yōu)化，建立了適于工廠規(guī)模油脂酶法脫膠工藝

全自動(dòng)酶標(biāo)儀318C+廣泛用于各大高校科研機(jī)構(gòu)、技術(shù)質(zhì)量監(jiān)督局、動(dòng)植物檢疫及食品飼料行業(yè)等，除開(kāi)展血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤免疫學(xué)、傳染病免疫學(xué)、TORCH感染免疫學(xué)、基因檢驗(yàn)項(xiàng)目外、還可以對(duì)食品安全三聚氰胺、黃曲霉素、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留等所有采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Elisa）進(jìn)行項(xiàng)目檢驗(yàn)，并且有相應(yīng)版本的軟件支持。   產(chǎn)品特點(diǎn)： 1、內(nèi)置嵌入式系統(tǒng)，無(wú)需外接電腦即可操作、存儲(chǔ)、打印; 2、測(cè)量模式：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)，雙波長(zhǎng)檢測(cè)，兩點(diǎn)法，動(dòng)力學(xué)法，酶抑制率，終點(diǎn)法、速率法。 3、*可選擇吸光度、Cut-Off定性計(jì)算、單點(diǎn)定標(biāo)、折線回歸、線性回歸、指數(shù)回歸、對(duì)數(shù)回歸、雙對(duì)數(shù)回歸、log-logit、冪回歸、四參數(shù)回歸、酶抑制率等計(jì)算方法；  4、在同一板上可進(jìn)行多至12個(gè)不同項(xiàng)目的測(cè)試，并可同一板檢測(cè)定性和定量項(xiàng)目。 5、*全面完善的質(zhì)控功能，包含westguard多規(guī)則質(zhì)控，即刻法質(zhì)控等多種質(zhì)控圖及質(zhì)控參數(shù)計(jì)算，具有質(zhì)控報(bào)警功能。   技術(shù)參數(shù)： 1、*波長(zhǎng)范圍： 400-800nm 2、*濾光片配置：10個(gè)濾光片位置，標(biāo)配405nm、450nm、492nm、630nm,選配6定制波長(zhǎng) 3、吸光度范圍：0.000―4.000A 4、*光通道數(shù)：8通道光路檢測(cè)，另設(shè)一個(gè)獨(dú)立參比通道（選配） 5、示值穩(wěn)定性：≤±0.002A或≤0.5%T/10min。 6、示值誤差（準(zhǔn)確性）：≤±0.005A或±0.2%T。 7、重復(fù)性：≤0.2%或≤0.2%T。 8、靈敏度：≥0.01（L/mg）。 9、通道差異：≤0.01A。 10、波長(zhǎng)示值誤差：±1nm 11、半寬度：≤8nm 12、分辨率：0.001A（顯示），0.0001A（內(nèi)部計(jì)算） 13、*讀板速度：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)≤3秒/96孔，雙波長(zhǎng)≤6秒/96孔 14、振板功能：速度和時(shí)間可調(diào) 15、光源類型：進(jìn)口鹵鎢燈 16、板條類型：標(biāo)準(zhǔn)96孔或其他型酶標(biāo)板、條 17、適用孔型：平底、U型和V型 18、顯示方式：7寸彩色液晶顯示屏顯示 19、輸入方式：觸摸屏輸入，可選配鼠標(biāo)和鍵盤 20、打印：內(nèi)置熱敏打印機(jī)，可外接打印機(jī) 21、數(shù)據(jù)儲(chǔ)存：200,000個(gè)測(cè)試數(shù)據(jù)，500個(gè)以上測(cè)試項(xiàng)目（可擴(kuò)展） 22、接    口： USB(A)口、USB(B)口、串口、并口 23、使用環(huán)境：溫度5-40℃；濕度15%-80% 24、電源電壓：220V±10%，50/60Hz 25、體積：475mm×350mm×210mm（長(zhǎng)×寬×高） 27、重量：11.5Kg

低聚異麥芽糖作為一種健康糖源和功能性食品添加劑廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和飼料添加劑行業(yè)中。在低聚異麥芽糖的制備過(guò)程中，α-葡萄糖苷酶的轉(zhuǎn)糖苷作用是關(guān)鍵步驟。目前國(guó)內(nèi)用于低聚異麥芽糖生產(chǎn)的α-葡萄糖苷酶大多為進(jìn)口品。本項(xiàng)目獲得的?-葡萄糖苷酶生產(chǎn)菌株發(fā)酵液酶活達(dá)到 11 U/mL，為國(guó)內(nèi)外現(xiàn) 有報(bào)道中的最高水平，發(fā)酵工藝簡(jiǎn)單易控。重組菌發(fā)酵液經(jīng)過(guò)濾除菌并濃縮后可以直接作為酶液進(jìn)行轉(zhuǎn)化。酶轉(zhuǎn)化生產(chǎn)低聚異麥芽糖轉(zhuǎn)化率與進(jìn)口酶相似，可以替代進(jìn)口品。 

本項(xiàng)目針對(duì)上述問(wèn)題，從分子、細(xì)胞和個(gè)體水平三個(gè)層面上研究人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)生物學(xué)行為及相關(guān)技術(shù)的臨床應(yīng)用，旨在提高兒童腫瘤療效。 1、主要科技內(nèi)容和技術(shù)特點(diǎn)： 1） 率先在國(guó)內(nèi)外建立RT-PCR和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)hTERT法，該法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、安全，適用于臨床推廣應(yīng)用。該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于兒童惡性腫瘤診斷、監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)個(gè)體化治療，提高了兒童腫瘤的診療水平。 2）首次在國(guó)內(nèi)外研究體內(nèi)造血干細(xì)胞hTERT的生物學(xué)行為，證明了hTERT與促紅細(xì)胞生成素的關(guān)系，并系統(tǒng)研究了惡性腫瘤細(xì)胞hTERT的生物學(xué)行為， 探討腫瘤細(xì)胞中Aurora A與hTERT及端粒酶表達(dá)的相關(guān)性，提出hTERT與細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)紊亂相互作用促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展的新觀點(diǎn)，為惡性腫瘤在分子水平上的監(jiān)測(cè)和以hTERT為靶點(diǎn)的生物工程治療提供了依據(jù)。 3） 在國(guó)內(nèi)外首次闡明端粒酶重建對(duì)成纖維細(xì)胞遷移能力和生物節(jié)律的調(diào)控，把端粒酶、hTERT生物學(xué)行為和生物節(jié)律與腫瘤擇時(shí)治療有機(jī)結(jié)合，為腫瘤治療提供了一條新路徑。實(shí)踐證明，在該理論指導(dǎo)下進(jìn)行化療，可明顯提高腫瘤化療效果，且毒副作用明顯減少。

CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced short palindromic repeats and CRISPR-associated proteins)是目前最常用的基因編輯工具酶，在科研領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，而在臨床方面的應(yīng)用因?yàn)槠涿摪谢钚砸欢韧磺啊Ｋㄟ^(guò)guide RNA（gRNA）與靶向DNA序列的配對(duì)，從而將Cas9錨定在靶向基因并誘導(dǎo)產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂（DSB）。在基因編輯誘發(fā)的DSB的修復(fù)過(guò)程中，一定幾率會(huì)產(chǎn)生基因突變或者外源DNA片段的插入，從而達(dá)到基因編輯的目的。在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，一個(gè)好的基因編輯酶Cas9需要同時(shí)滿足高效切割靶位點(diǎn)、低脫靶活性和低染色體異常三個(gè)特點(diǎn)。目前在這三個(gè)方面，有一部分基于PCR的方法用于估算基因編輯效率，但其結(jié)果可靠性有待提高；有一些基于高通量測(cè)序的方法可以在體內(nèi)或者體外檢測(cè)基因編輯酶的脫靶活性；尚無(wú)系統(tǒng)的可定量的測(cè)量基因組異常結(jié)構(gòu)的方法。本項(xiàng)目開(kāi)發(fā)了一種新的方法，可以用來(lái)同時(shí)定量檢測(cè)Cas9編輯效率和脫靶活性以及編輯引起的染色體異常結(jié)構(gòu)，即primer-extension-mediated sequencing（PEM-seq）。這是對(duì)基因編輯和DNA損傷修復(fù)等領(lǐng)域都有巨大促進(jìn)作用的新技術(shù)。與此同時(shí)，該項(xiàng)目包括了該團(tuán)隊(duì)利用PEM-seq篩選出的一個(gè)相比于現(xiàn)有Cas9變體具有更低脫靶活性且與野生型Cas9切割效率相當(dāng)?shù)腃as9變體further enhanced Cas9 (FeCas9)。

發(fā)酵香腸是一類高檔肉制品，以其風(fēng)味受到消費(fèi)者歡迎。本技術(shù)利用酶法促 進(jìn)發(fā)酵香腸生產(chǎn)過(guò)程中風(fēng)味的形成，在保持產(chǎn)品原有風(fēng)味、香型不變的情況下， 使其風(fēng)味物質(zhì)形成量增大 7 倍（以 GC/MS 出峰面積計(jì)），生產(chǎn)時(shí)間明顯縮短，產(chǎn) 品風(fēng)味更濃、持久性更強(qiáng)。