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本技術(shù)成果通過(guò)整合電化學(xué)、微機(jī)電和自動(dòng)化控制技術(shù)，開(kāi)發(fā)了一套適合于 出入境口岸動(dòng)物疫病等的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)設(shè)備 便攜式動(dòng)物疫病現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)儀。檢 測(cè)儀在結(jié)構(gòu)上不同于現(xiàn)有的進(jìn)口濁度儀，采用自主開(kāi)發(fā)的微機(jī)電加熱技術(shù)保證疫 病基因的高效等溫?cái)U(kuò)增，同時(shí)集成可視化微型紫外檢測(cè)模塊使得結(jié)果的觀察和判 斷更為方便。該儀器具備穩(wěn)定的溫度控制電路、便捷的結(jié)果檢測(cè)方式，體積小方 便攜帶，且具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，避免了使用價(jià)格昂貴，且不便攜帶的實(shí)時(shí)濁度儀、 PCR儀或水浴鍋，適合于出入境口岸對(duì)動(dòng)物疫病等進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)的快速診斷或篩查。實(shí)驗(yàn)樣機(jī)采用鏈置換聚合酶引導(dǎo)下的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)生成大量焦磷酸 鎂沉淀和DNA產(chǎn)物的原理，包括四路并行的單色激光器和二極管陣列光電檢測(cè) 器，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中的生物基因（DNA）進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)和分析。同時(shí)，利用磁珠 法提取核酸的基本理論，研制了手持式核酸提取裝置，對(duì)細(xì)胞中的核酸（DNA 和RNA）完成純化和提取，完成的樣本前處理工作，整個(gè)過(guò)程不需要離心機(jī)，單 個(gè)提取時(shí)間不超過(guò)30分鐘。從樣本前處理到后續(xù)的基因檢測(cè)，完成單個(gè)樣本檢 測(cè)的平均時(shí)間不超過(guò)60分鐘，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品、農(nóng)產(chǎn)品、肉制品、水產(chǎn)品中各類(lèi) 病原微生物的快速檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)查驗(yàn)。

研發(fā)階段/n以食源性病原菌菌高度保守的基因?yàn)榘谢颍O(shè)計(jì)了兩組能在60℃~65℃的溫度條件下擴(kuò)增該基因的特異性引物（一組內(nèi)引物FIP和BIP，一組外引物F3和B3），在64℃左右的恒溫條件下即可完成對(duì)靶基因的特異性擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)食源性病原菌的快速檢測(cè)。技術(shù)水平：該技術(shù)特異性高，設(shè)備簡(jiǎn)單，僅需一個(gè)水浴鍋，反應(yīng)結(jié)果肉眼可辨，檢測(cè)時(shí)間1.5小時(shí)。本技術(shù)已經(jīng)申請(qǐng)專(zhuān)利。

團(tuán)隊(duì)對(duì)12例多灶肝癌患者的45個(gè)腫瘤樣本及對(duì)應(yīng)癌旁正常組織進(jìn)行了全基因組測(cè)序、全外顯子測(cè)序及RNA測(cè)序。研究發(fā)現(xiàn)同一患者的大癌灶和小癌灶的基因組特征存在極大的相似性，包括相同的HBV-DNA整合位點(diǎn)，相似的染色體結(jié)構(gòu)變異、突變特征及拷貝數(shù)變化情況，提示12例多灶肝癌患者的大癌灶和小癌灶屬于肝內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤。該團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步分析45個(gè)癌灶的免疫微環(huán)境，發(fā)現(xiàn)同一患者中，與大癌灶相比，小癌灶具有更多的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，免疫活性刺激因子以及預(yù)測(cè)PD-1抗體治療療效的干擾素相關(guān)特征在小癌灶中表達(dá)上調(diào)。免疫相關(guān)通路在小癌灶中富集，而增殖及血管生成相關(guān)通路在大癌灶中更富集。此外，大部分小癌灶呈現(xiàn)sia分型中的“免疫反應(yīng)亞型”。這些結(jié)果表明，同一肝癌患者的小癌灶比大癌灶具有更活躍的免疫狀態(tài)。     為進(jìn)一步探討不同大小的癌灶對(duì)PD-1抗體治療是否具有不同的治療響應(yīng)，該團(tuán)隊(duì)對(duì)8例接受PD-1抗體治療的多灶肝癌患者全部癌灶的免疫治療應(yīng)答情況進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中5例多灶肝癌患者的大癌灶和小癌灶對(duì)PD-1抗體治療存在混合反應(yīng)，均體現(xiàn)為小癌灶具有更好的免疫治療療效——PD-1抗體治療后，小癌灶平均縮小46.3%，而同一病例的大癌灶平均增加14.9%。

項(xiàng)目成果/簡(jiǎn)介:針對(duì)養(yǎng)殖魚(yú)蝦主要流行性疾病的病原，解決病原檢測(cè)與疾病診斷的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，研制出病原的單克隆抗體，應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)，設(shè)計(jì)研制出對(duì)蝦白斑癥病毒（WSSV）膠體金檢測(cè)試紙、WSSV半定量快速檢測(cè)試紙、魚(yú)類(lèi)淋巴囊腫病毒（LCDV）膠體金試紙條、牙鲆彈狀病毒（HIRRV）膠體金試紙條、魚(yú)類(lèi)病原性弧菌快速檢測(cè)試紙等。檢測(cè)僅需3~5分鐘，不需要專(zhuān)業(yè)儀器設(shè)備專(zhuān)業(yè)人員操作，在現(xiàn)場(chǎng)即可進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果肉眼可見(jiàn)，用于魚(yú)蝦主要病原的現(xiàn)場(chǎng)、多病原/多樣品、快速、準(zhǔn)確檢測(cè)診斷。實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)動(dòng)物病原的現(xiàn)場(chǎng)、快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)。系列檢測(cè)試紙條通過(guò)優(yōu)化制備工藝、質(zhì)控體系，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)生產(chǎn)，應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中病原的實(shí)時(shí)檢測(cè)及早期診斷、進(jìn)口魚(yú)蝦的檢疫，滿足海水養(yǎng)殖動(dòng)物疾病監(jiān)控預(yù)警需求，指導(dǎo)疾病準(zhǔn)確防治，能夠有效預(yù)防養(yǎng)殖過(guò)程疾病的發(fā)生、傳播和流行，降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)。項(xiàng)目階段:實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段效益分析:該成果可應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)疾病檢測(cè)診斷。研發(fā)的海水養(yǎng)殖魚(yú)蝦主要疾病的快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)試劑盒，可應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中病原的實(shí)時(shí)檢測(cè)及早期診斷、進(jìn)口魚(yú)蝦的檢疫，以快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)診斷為核心的海水魚(yú)蝦類(lèi)疾病預(yù)警預(yù)報(bào)技術(shù)，能夠有效預(yù)防了養(yǎng)殖過(guò)程疾病的發(fā)生、傳播和流行，降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)，是綠色可持續(xù)海水養(yǎng)殖健康發(fā)展的有力保障，具有較好社會(huì)、經(jīng)濟(jì)與生態(tài)環(huán)境效益，應(yīng)用前景廣闊。知識(shí)產(chǎn)權(quán)類(lèi)型:發(fā)明專(zhuān)利 、 軟件著作權(quán)知識(shí)產(chǎn)權(quán)編號(hào):ZL200410075530.9 ZL200510042127.0 ZL200410075528.1 ZL200610045594.3 ZL201310472419.2 ZL201710144784.9技術(shù)成熟度:通過(guò)中試技術(shù)先進(jìn)程度:達(dá)到國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平成果獲得方式:獨(dú)立研究獲得政府支持情況:無(wú)

針對(duì)養(yǎng)殖魚(yú)蝦主要流行性疾病的病原，解決病原檢測(cè)與疾病診斷的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，研制出病原的單克隆抗體，應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)，設(shè)計(jì)研制出對(duì)蝦白斑癥病毒（WSSV）膠體金檢測(cè)試紙、WSSV半定量快速檢測(cè)試紙、魚(yú)類(lèi)淋巴囊腫病毒（LCDV）膠體金試紙條、牙鲆彈狀病毒（HIRRV）膠體金試紙條、魚(yú)類(lèi)病原性弧菌快速檢測(cè)試紙等。檢測(cè)僅需3~5分鐘，不需要專(zhuān)業(yè)儀器設(shè)備專(zhuān)業(yè)人員操作，在現(xiàn)場(chǎng)即可進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果肉眼可見(jiàn)，用于魚(yú)蝦主要病原的現(xiàn)場(chǎng)、多病原/多樣品、快速、準(zhǔn)確檢測(cè)診斷。實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)動(dòng)物病原的現(xiàn)場(chǎng)、快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)。 系列檢測(cè)試紙條通過(guò)優(yōu)化制備工藝、質(zhì)控體系，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)生產(chǎn)，應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中病原的實(shí)時(shí)檢測(cè)及早期診斷、進(jìn)口魚(yú)蝦的檢疫，滿足海水養(yǎng)殖動(dòng)物疾病監(jiān)控預(yù)警需求，指導(dǎo)疾病準(zhǔn)確防治，能夠有效預(yù)防養(yǎng)殖過(guò)程疾病的發(fā)生、傳播和流行，降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)。

本研究利用人工合成的免疫抗原，經(jīng)動(dòng)物免疫后獲得特異性好的多克隆抗體，建立了 MC-LR 高靈敏間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 檢測(cè)方法，經(jīng)和國(guó)外進(jìn)口的同類(lèi)產(chǎn)品比較，在很多關(guān)鍵指標(biāo)上已經(jīng)達(dá)到或超過(guò)進(jìn)口產(chǎn)品。該藻毒素快速檢測(cè)技術(shù)和檢測(cè)產(chǎn)品，靈敏度較高，特異性好，制備簡(jiǎn)單，成本低廉，適合規(guī)模化試劑盒的生產(chǎn)。 創(chuàng)新要點(diǎn) （1）性能指標(biāo)達(dá)到國(guó)際先進(jìn)水平。經(jīng)第三方專(zhuān)業(yè)權(quán)威機(jī)構(gòu)或部門(mén)的驗(yàn)證（附件 11），最低能檢測(cè)出 0.05ng/ml 的 MC-LR 含量，本項(xiàng)目產(chǎn)品技術(shù)含量高，操作簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果靈敏準(zhǔn)確，檢測(cè)成本低廉

通過(guò)對(duì)NMDA患者及健康南方漢族人群進(jìn)行HLA基因分型，研究發(fā)現(xiàn)HLA_DRB1*16:02等位基因和抗NMDAR腦炎相關(guān)。另外，除了增加疾病易感性外，HLA_DRB1*16:02等位基因和該疾病針對(duì)治療反應(yīng)相關(guān)，表現(xiàn)為攜帶該等位基因患者對(duì)治療反應(yīng)較差。最后，利用生物信息技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，NMDAR的NR1亞單位上的抗原表位能夠與HLA II類(lèi)DRB1*16:02分子緊密結(jié)合，顯示它可能是導(dǎo)致疾病的T細(xì)胞抗原表位。

本發(fā)明涉及一種新的免疫毒素，其特征在于利用人源性毒素穿孔素（Perforin）的活性片斷作為毒素分子，通過(guò)基因工程技術(shù)將毒素分子與載體分子的基因重組在大腸桿菌中表達(dá)出的免疫毒素，其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)人體不具有免疫原性，有嚴(yán)格靶向性，可直接激發(fā)細(xì)胞損傷過(guò)程，殺滅靶細(xì)胞，不需要內(nèi)化及細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，可用于治療某些腫瘤和自身免疫性疾病。特別是適合于抑制器官移植時(shí)的免疫排斥

已有樣品/n微粒均相免疫檢測(cè)平臺(tái)是新一代免疫檢測(cè)技術(shù)，基于生物合成的納米載體和新的標(biāo)記技術(shù)，結(jié)合圖像識(shí)別和微通道分析技術(shù)，能實(shí)現(xiàn)對(duì)微量樣本（5-10μL 樣本/次），在 1-10 分鐘內(nèi)對(duì)抗原或抗體的檢測(cè)，靈敏度比傳統(tǒng)的免疫凝集檢測(cè)高 100-1000 倍。特別適合快速鑒定病原菌及對(duì)血清樣本中特定抗體的篩查等。目前已成功應(yīng)用于大腸桿菌 O157：H7 的鑒定及中東呼吸道綜合征冠狀病毒（MERS-CoV）的抗體檢測(cè)。 市場(chǎng)前景:可廣泛應(yīng)用于各類(lèi)病原快速檢測(cè)，前景廣闊。

涉及一種膠體金半定量免疫診斷試紙條的制作和裝配方法。該試 紙條利用免疫層析原理，可迅速目檢出納米膠體金標(biāo)記物和樣品結(jié)合 后的顏色，并通過(guò)測(cè)試區(qū)與平行參比區(qū)的顏色對(duì)比的強(qiáng)弱來(lái)判定檢測(cè) 的半定量結(jié)果，具有反應(yīng)迅速，可迅速判定樣品中待測(cè)物的有無(wú)及其 含量高低的特性。