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一種單鏈片段抗體-多肽融合蛋白及其應用
項目成果/簡介:本發明提供了一種單鏈片段抗體-多肽融合蛋白及其應用,該蛋白是一種具有結合 Her2受體和攜帶抗癌siRNA藥物雙向功能的融合蛋白,可以作為抗癌siRNA的藥物 載體。其中,單鏈片段抗體為Her2-ScFv,多肽為魚精蛋白片段多肽。該單鏈片段抗 體-多肽融合蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示的序列。本發明構建的Her2單鏈片段抗 體與魚精多肽的融合蛋白具有結合Her2受體和攜帶抗癌siRNA藥物的雙向功能。本 發明的融合蛋白能把抗癌siRNA藥物定向導入目標癌細胞中,開發了非病毒載體工 具,加速RNAi技術應用于臨床。項目階段:成果已轉化
中山大學
2021-04-10
一種TNFSF15可溶性蛋白的純化方法
本發明涉及一種TNFSF15可溶性蛋白的純化方法，包括如下步驟：(1).IPTG誘導、(2).菌體裂解、(3).上柱洗脫、(4).除鹽分裝。本發明純化方案通過低溫誘導的方式，并且以很低的IPTG誘導濃度，降低蛋白在包涵體中的表達，提升可溶性蛋白的含量，并用較為溫和的裂解純化方式，提高蛋白的穩定性和活性。并且操作簡便，制作周期短，消耗資源少，方便放大生產。
南開大學
2021-04-10
吳益東教授團隊揭示Bt殺蟲蛋白“雙通道”進攻機制
南京農業大學植物保護學院吳益東教授團隊在Bt殺蟲機制研究方面取得重要進展，發現了Bt殺蟲蛋白對棉鈴蟲的一種新型“雙通道”殺蟲機制。 吳益東教授團隊的最新研究發現，棉鈴蟲ABC轉運蛋白ABCC2和ABCC3均為Bt受體，用CRISPR基因編輯技術分別敲除這兩個基因，不能獲得Bt抗性；而同時敲除這兩個基因后獲得了超過1.5萬倍的極高水平抗性。這意味著，同時敲除這兩個基因會使Bt毒素對棉鈴蟲的進攻完全失效。 吳益東解釋，ABCC2和ABCC3是一對結構高度相似、功能相互重疊的Bt受體，Bt毒素在尋找受體發起攻勢時，相當于獲取了深入敵營的“雙重通道”。因此，棉鈴蟲缺失ABCC2和ABCC3中的任何一個受體均不影響Bt的殺蟲效果，從而限制了棉鈴蟲在ABCC2和ABCC3通路上的抗性進化能力。 棉鈴蟲和Bt毒素的攻防之間，存在著相互適應、協同進化的復雜關系。在Bt毒素對棉鈴蟲“雙通道”殺蟲機制的壓制下，棉鈴蟲可以避其鋒芒，在Bt毒素進攻薄弱環節進化出新的抗性機制。在吳益東教授團隊的前期研究中，發現了棉鈴蟲為削弱Bt殺蟲能力進化出的2種抗性機制：一種是棉鈴蟲Bt受體HaCad（一種鈣粘蛋白）通過基因缺失突變，另一種是四跨膜蛋白TSPAN1通過L31S點突變，在這兩種情況下，棉鈴蟲通過喪失HaCad的受體功能或增強腸道修復能力，使Bt抗性顯著增強。 團隊的研究還發現，我國棉鈴蟲田間抗性個體攜帶的抗性基因在2010年前以HaCad突變為主，2013年后以TSPAN1點突變為主，尚未在田間檢測到ABCC2和ABCC3突變，其中原因，可能正是這次的研究所揭示的，是ABCC2和ABCC3這一對功能冗余的受體為Bt毒素的進攻提供了相互并聯的“雙通道”，因此捆住了棉鈴蟲利用這一對受體發生變異而逃逸攻擊的“手腳”。
南京農業大學
2021-02-01
萬建民院士團隊揭示稻米蛋白品質形成分子機制
我校萬建民院士團隊在植物學權威刊物《The Plant Cell》在線出版了題為“GPA5encodes a Rab5a effector required for post-Golgi trafficking of rice storageproteins”的研究成果。 萬建民院士團隊發現了一個新的谷蛋白后高爾基體分選缺陷突變體gpa5，通過圖位克隆的方法證實GPA5編碼一個具有磷脂結合能力的植物特有調控因子。在胚乳細胞中，GPA5特異分布在致密囊泡外圍。亞細胞定位分析證實GPA5的膜定位依賴于前期鑒定的GPA1/Rab5a和GPA2/VPS9a。生化分析進一步證實GPA5可特異與GPA1/Rab5a的激活態形式互作，表明GPA5可能是GPA1/Rab5a的效應子（effector）。后續的功能研究發現，GPA5可與栓系復合體CORVET和含有VAMP727的膜融合復合體SNARE互作，介導致密囊泡與蛋白貯藏液泡的膜融合，以完成谷蛋白的轉運。 萬建民院士團隊以解析水稻谷蛋白合成、轉運和沉積的分子網絡途徑為目標，長期致力于稻米蛋白品質改良的分子遺傳基礎研究。本研究是該團隊在《植物細胞（The Plant Cell）》和《分子植物（Molecular Plant）》等雜志相繼報道GPA1/Rab5a, GPA2/VPS9a,GPA3和GPA4/Got1B調控谷蛋白分選后，在稻米蛋白品質形成的分子機理研究中取得的又一重要進展，進一步豐富了人們對谷蛋白轉運分子網絡途徑的認識，為稻米蛋白品質的改良奠定了理論基礎。
南京農業大學
2021-02-01
冷凍電鏡技術解析新冠病毒受體ACE2蛋白
西湖大學周強實驗室利用冷凍電鏡技術成功解析此次新冠病毒的受體——ACE2的全長結構。這是世界上首次解析出ACE2的全長結構。相關研究內容于北京時間2月19日凌晨3點左右在預印版平臺bioRxiv上線。這也是西湖大學承擔的浙江省新型冠狀病毒肺炎防治應急科研攻關任務的重要成果。 新型冠狀病毒感染引發的肺炎疫情爆發后，武漢病毒研究所的科學家發現，新型冠狀病毒和2003年的SARS病毒一樣，也是通過識別ACE2蛋白進入人體細胞的，ACE2是“新冠病毒”侵入人體的關鍵。研究發現，在SARS病毒和“新冠病毒”侵入人體的過程中，ACE2就像是“門把手”，病毒抓住它，從而打開了進入細胞的大門。 周強實驗室針對這個問題進行了攻堅。第一步，他們要獲取ACE2蛋白全長蛋白，但作為膜蛋白的ACE2本身很難在體外穩定獲得。周強及博士后鄢仁鴻在文獻中發現ACE2與腸道內的一個氨基酸轉運蛋白B0AT1能夠形成復合物。根據他們過去的研究經驗，這個復合物極有可能穩定住ACE2。果然，他們通過共表達的方法獲得了ACE2與B0AT1優質穩定的復合物，并利用西湖大學的冷凍電鏡平臺成功解析了其三維結構，分辨率達到2.9埃，對于病毒識別至關重要的胞外結構域分辨率為2.7埃。通過分析ACE2的全長蛋白結構，周強實驗室發現ACE2以二聚體形式存在，同時具有開放和關閉兩種構象變化，但兩種構象均含有與冠狀病毒的相互識別界面。一研究發現為進一步解析全長ACE2和新冠病毒的S蛋白復合物的三維結構奠定了基礎。
西湖大學
2021-04-10
蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP3及其編碼的核酸序列
本發明公開了一種蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP3編碼的核酸序列，所分離出的DNA分子包括：編碼具有蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP3活性的多肽核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ？ID？NO：1中從核苷酸第767-871位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者該核苷酸序列能在40-55℃條件下與SEQ？ID？NO：1中從核苷酸第767-871位的核苷酸序列雜交。本發明還同時公開了一種蝶蛹金小蜂抗菌蛋白多肽Pp-AP3，其具有SEQ？ID？NO：2所示的氨基酸序列。本發明的蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP3具有抗菌性能。
浙江大學
2021-04-11
蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5及其編碼的核酸序列
本發明公開了一種蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5編碼的核酸序列，所分離出的DNA分子包括：編碼具有蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5活性的多肽核苷酸序列，該核苷酸序列與SEQ？ID？NO：1中從核苷酸第329-454位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者該核苷酸序列能在40-55℃條件下與SEQ？ID？NO：1中從核苷酸第329-454位的核苷酸序列雜交。本發明還同時公開了一種蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5，其具有SEQ？ID？NO：2所示的氨基酸序列。蝶蛹金小蜂抗菌蛋白Pp-AP5具有抗菌性能。
浙江大學
2021-04-11
海洋紫球藻聯產花生四烯酸與藻紅蛋白
-5,8,11,14-二十碳四烯酸，是屬于ω-6系列的一種人體必需的多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids，PUFAs)，具有廣泛的生物活性和重要的營養作用。ARA不僅是機體組織細胞膜的結構成分，同時, 它也是內循環系統和中樞神經系統中起重要作用的前列腺素、環前列腺素和白三烯類等二十碳衍生物的直接前體。另外，ARA也是成熟母乳成分之一，它對嬰兒的視力和智力發育是必需的。因此，英國營養基金會和FAO/WHO推薦在嬰兒奶粉中添加DHA和ARA。ARA及其代謝產物的生理功效還包括：在細胞內可發揮第二信使作用，參與造血和免疫調節，引起血管舒張，參與肝、膽多種功能的調節，引起炎癥反應及參與神經內分泌和促進細胞分裂等。在水產動物營養方面，ARA是許多魚類幼體、對蝦幼體的必需脂肪酸，關系到幼體的生長發育和存活。餌料中添加ARA，可提高投喂動物的生長速度和存活率。藻膽蛋白是某些藻類特有的重要捕光色蛋白,早在上個世紀初,就曾報道在藍藻和紅藻中存在強烈熒光性的紅色、紫羅藍色和藍色蛋白質。科學研究表明，藻膽蛋白是一種既可以作為天然色素用于食品、化妝品、染料等工業上，也可制成熒光試劑，用于臨床醫學診斷和免疫化學及生物工程等研究領域中。另外，還可以制成食品和藥品用于醫療保健上，應用范圍廣闊，具有很高的開發、利用價值。藻膽蛋白主要存在于藍藻、紅藻、隱藻和少數一些甲藻中 ,其主要功能是作為光合作用的捕光色素復合體 ,在一些藻類中藻膽蛋白也可以作為儲藏蛋白 ,以使藻類在氮源缺乏的季節得以生存。已知的藻膽蛋白主要可以分為以下4大類：藻紅蛋白(Phycoerythrin,PE)、藻藍蛋白(Phycocyanin,PC)、藻紅藍蛋白(Phycoerythrocyanin,PEC)、別藻藍蛋白(Allophyxoxyanin,APC)。
廈門大學
2021-04-11
蛋白質羰基化修飾的標記和組學鑒定
以經典的LDE分子4-羥基壬烯醛（HNE）為模型，結合還原性二甲基化標記技術，實現了對外源的羰基化修飾蛋白和位點進行了直接的大規模捕獲和鑒定 (Redox Biol 2017,12, 712-718)。然而鑒定病理條件下內源性羰基化的修飾蛋白及位點仍是該領域的重大挑戰。為了解決這一難題，王初課題組首次將廣泛應用于oxime ligation中的催化劑苯胺結構引入到活性分子探針中，首先以HNE為模型分子，建立和優化了蛋白羰基化修飾的定量化學蛋白質組方法，實現了對上千個羰基化修飾位點的修飾活性的定量分析。
北京大學
2021-04-11
一種谷朊蛋白膠體顆粒及其制備方法和用途
本發明公開了一種谷朊蛋白膠體顆粒及其制備方法和用途，制備方法包括：谷朊蛋白在谷氨酰胺轉氨酶作用下發生交聯反應，形成谷朊蛋白膠體顆粒，反應體系中添加有帶伯胺基團的親水小分子，所述帶伯胺基團的親水小分子為L?賴氨酸、氨基葡萄糖和L?谷氨酸中的至少一種，所述帶伯胺基團的親水小分子與谷朊蛋白的質量比為1:10?100。本發明在反應體系中添加了帶伯胺基團的親水小分子，谷朊蛋白發生分子間和分子內交聯的同時，與帶伯胺基團的親水小分子發生交聯反應，一方面可以抑制谷氨酰胺轉氨酶催化谷朊蛋白中的谷氨酰胺或天冬酰胺進行去酰胺反應，另一方面由于帶伯胺基團的親水小分子含有帶電荷的基團，將賦予谷朊蛋白更高的表面電荷。
浙江大學
2021-04-13