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本發明公開了一種抗蟲融合基因,該基因包括從5’-3’依次含有編碼BT晶體毒素Cry1的核苷酸序列和編碼Cry9Aa毒素的核苷酸序列;且上述2個核苷酸序列位于同一個開放閱讀框內。該抗蟲融合基因包括Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Aa的修飾基因、Cry1Ab的修飾基因或Cry1Ac的修飾基因;還包括Cry9Aa或者Cry9Aa經過修飾的基因。本發明還同時公開了上述抗蟲融合基因所編碼的融合蛋白,該融合蛋白從N端至C端依次為Cry1晶體毒素和Cry9Aa毒素。本發明的融合蛋白能用于制備轉基因抗蟲農作物。

鹽堿、干旱、高溫、凍害和洪澇等逆境脅迫嚴重影響作物的正常生長發育，是造成農作物減產和品質下降的主要原因之一，嚴重影響 農業的可持續發展。另一方面，對于糧食作物和多數經濟作物來說， 其功能葉片中的同化產物和衰老葉片中的營養物質不斷向產量器官 的轉運，對作物產量和品質性狀的形成具有重要的作用，作物的過早 衰老不僅直接影響糧食作物的產量和品質等要素，對于綠葉類作物和 觀賞花卉還會影響到其貨架壽命以及觀賞價值等。 克隆葉片衰老和逆境抗性相關基因，并利用生物工程技術調控其 在主要經濟作物中的表達方式和表達水平，是提高和穩定作物產量、 改善作物品質性狀的有效手段，具有重大的經濟效益和社會效益。然 而，很多衰老或逆境抗性相關基因在植物細胞中高表達后，在增強轉 基因植株對特定脅迫的抗性、延緩植株衰老的同時，往往伴隨著對植 株正常生長和發育的不利影響，如導致植株矮小、生長遲緩或產量下 降等，導致該基因無法直接應用于抗逆作物的培育。如果可以特異性 地表達這些基因，讓它們在特定的發育階段或脅迫條件下高表達，而 在正常的生長過程中維持在較低的基礎水平，可以大大提高它們在基 因工程中的應用性。 課題組前期克隆了一個植物葉片衰老的負調控因子。在轉基因植 物中過表達該基因可以顯著延緩植物的衰老，并賦予植物對高鹽、干 旱等脅迫的抗性，但是，轉基因植物的生長發育受到明顯抑制，導致 該基因無法被直接應用于抗逆作物的育種工作。課題組前期還分離鑒 定了一段含有 14 個氨基酸的多肽序列，命名為 WX01。我們對 WX01 的功能研究發現其包含獨特的蛋白降解信號，能夠響應發育與環境信號，在轉錄后水平調控與它融合的目的蛋白的穩定性，從而使目的蛋 白在光下正常旺盛生長的植株中降解、但在啟動衰老或者高鹽、高溫 和失水等多種逆境脅迫條件下特異積累。我們利用 WX01 與前述衰 老負調節因子構建了融合基因 WX02，并轉入模式植物擬南芥中，發 現該融合基因可以恢復衰老負調節因子積累造成的植株矮小、生長抑 制的表型，但是保留了其延緩衰老、促進光合和提高轉基因植物對高 鹽、干旱等逆境脅迫的抗性的功能。課題組進一步將 WX02 融合基因 轉入經濟作物大豆中進行功能驗證，獲得了可穩定遺傳的多個株系單 拷貝純合轉基因大豆材料。對轉基因大豆的表型分析同樣證明， WX02 轉基因大豆對高鹽、干旱脅迫的抗性顯著提高。上述研究結果 表明 WX02 融合基因在抗逆轉基因作物新品種培育中具有重要的應 用價值。圍繞該項目已經申請了 2 項國家發明專利，1 項國際 PCT 專 利，其中 1 項國家發明專利已經獲得授權。 

項目成果/簡介:本發明公開了一種小麥抗穗發芽基因TaZFP18,所述基因包含如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列,或包含與SEQ?ID?NO.1序列互補的核苷酸序列,該基因編碼CCCH型鋅指蛋白18,可作為小麥穗發芽抗感品種的分子標記基因.該小麥抗穗發芽基因TaZFP18為一種新的小麥抗穗發芽主效基因,利用其開發分子標記,可以迅速鑒定小麥是否為穗發芽抗性品種,也為小麥穗發芽抗性育種提供了新的基因資源.

本發明公開了一種小麥抗穗發芽基因TaZFP18,所述基因包含如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列,或包含與SEQ?ID?NO.1序列互補的核苷酸序列,該基因編碼CCCH型鋅指蛋白18,可作為小麥穗發芽抗感品種的分子標記基因.該小麥抗穗發芽基因TaZFP18為一種新的小麥抗穗發芽主效基因,利用其開發分子標記,可以迅速鑒定小麥是否為穗發芽抗性品種,也為小麥穗發芽抗性育種提供了新的基因資源.

可以量產/n該項目屬于作物標記輔助育種技術領域，具體涉及利用抗除草劑基因的油菜化學殺雄制種方法。本發明的特征包括培育耐受化學殺雄劑的父本材料和無遮擋的化學殺雄步驟。利用化學誘變劑誘變甘藍型油菜種子，在5-6葉期噴施除草劑苯磺隆，初步篩選得到抗除草劑的突變體材料，自交得到穩定遺傳的抗除草劑油菜突變體株系，提取油菜突變體株系基因組DNA，擴增得到BnaAHAS1和BnaAHAS3基因片段，其中BnaAHAS3基因片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，在該基因BnaAHAS3第536bp處存在一個

中試階段/n該項目提供一種評價轉基因抗蟲水稻水生環境安全性的方法，包括如下步驟：轉基因稻田和非轉基因稻田布置和管理；稻田水層和淤泥中外源蛋白的測定，包括樣本預處理和外源蛋白的抽提和測定；稻田水層中浮游生物的分離，包括水樣采集、沉淀分離浮游生物；稻田水層中浮游生物種類和豐度的測定，包括活體鑒定和數量計數；轉基因抗蟲水稻的種植對浮游生物的安全性評價，利用分析軟件對浮游生物種類、數量、發生時期進行統計分析，得出多樣性指數、均勻性指數等參數，并和常規稻田進行比較，從而對轉基因抗蟲水稻水生環境安全性進行評價。

本成果提供了一種包含特定 RNAi 片段的可有效控制水稻黑條矮縮病的專用載體，將該載體轉入水稻獲得的轉基因水稻對黑條矮縮病毒近乎免疫， 生長全程均不需要采取對該病毒病的任何防治措施。