首先選取了序列特征各異的12條富含RGG的多肽片段,利用SPR技術(shù)評(píng)價(jià)多肽片段對(duì)G-四鏈體的結(jié)合能力。再結(jié)合filter-binding、NMR等研究手段,發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了含有7個(gè)RGG重復(fù)單元的多肽12能選擇性識(shí)別G-四鏈體結(jié)構(gòu),其識(shí)別位點(diǎn)為G-四鏈體的四分體平面。利用序列突變和序列重排等方式,作者證實(shí)多肽12對(duì)G-四鏈體的特異識(shí)別存在明顯的序列特異性,這種特異性同時(shí)表現(xiàn)在氨基酸的類型以及其特定的排布順序上。基于上述結(jié)果,作者對(duì)含有該RGG多肽序列的蛋白進(jìn)行數(shù)據(jù)庫搜索,發(fā)現(xiàn)了cold-inducible RNA-binding protein(CIRBP),并通過一系列實(shí)驗(yàn)證實(shí)該蛋白能在細(xì)胞內(nèi)外有效識(shí)別G-四鏈體。值得注意的是,該RGG肽段在CIRBP識(shí)別G-四鏈體的過程中起關(guān)鍵作用,突變或缺失都會(huì)導(dǎo)致蛋白識(shí)別G-四鏈體的能力顯著下降。該研究首次通過RGG多肽序列與G-四鏈體相互作用的系統(tǒng)研究,發(fā)現(xiàn)了全新的G-四鏈體結(jié)合蛋白,并為將來發(fā)現(xiàn)更多的G-四鏈體結(jié)合蛋白提供了一種新途徑。
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